| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-48页 |
| 1.1 糖的简介 | 第12-33页 |
| 1.1.1 糖的发现和研究历史 | 第12-13页 |
| 1.1.2 糖的种类和结构 | 第13-21页 |
| 1.1.3 糖的生物合成过程及相关的酶 | 第21-29页 |
| 1.1.4 糖的生物学功能 | 第29-33页 |
| 1.2 糖相互作用的蛋白 | 第33-39页 |
| 1.2.1 糖胺聚糖结合蛋白 | 第34页 |
| 1.2.2 凝集素 | 第34-39页 |
| 1.3 糖组学研究方法 | 第39-42页 |
| 1.3.1 基于质谱的糖组学研究 | 第39-40页 |
| 1.3.2 基于糖芯片的糖组学研究 | 第40-41页 |
| 1.3.3 基于凝集素的糖组学研究 | 第41-42页 |
| 1.4 植物凝集素芯片的研究进展 | 第42-46页 |
| 1.4.1 植物凝集素芯片的开发 | 第42-44页 |
| 1.4.2 凝集素芯片的应用 | 第44-46页 |
| 1.5 本文的主要研究目的、内容和意义 | 第46-48页 |
| 1.5.1 研究目的 | 第46-47页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第47页 |
| 1.5.3 研究意义 | 第47-48页 |
| 第二章 人凝集素芯片的构建及质检 | 第48-67页 |
| 2.1 引言 | 第48-49页 |
| 2.2 实验材料试剂与仪器耗材 | 第49-50页 |
| 2.2.1 实验材料和试剂 | 第49-50页 |
| 2.2.2 实验仪器和耗材 | 第50页 |
| 2.3 实验方法 | 第50-60页 |
| 2.3.1 制备人凝集素和类人凝集素蛋白酵母表达库 | 第50-52页 |
| 2.3.2 人凝集素和类人凝集素蛋白重组表达及纯化 | 第52-53页 |
| 2.3.3 制备人凝集素芯片 | 第53-58页 |
| 2.3.4 人凝集素芯片质检 | 第58页 |
| 2.3.5 用细胞裂解液检验芯片上人凝集素及类人凝集素蛋白活性 | 第58-59页 |
| 2.3.6 用活细胞检验芯片上人凝集素及类人凝集素蛋白活性 | 第59-60页 |
| 2.4 结果和分析 | 第60-65页 |
| 2.4.1 人凝集素蛋白酵母表达株的构建及重组蛋白的纯化 | 第60-61页 |
| 2.4.2 人凝集素芯片的制备 | 第61-62页 |
| 2.4.3 细胞裂解液验证芯片上人凝集素的活性 | 第62-63页 |
| 2.4.4 活细胞验证芯片上人凝集素的活性 | 第63-65页 |
| 2.5 本章小结与讨论 | 第65-67页 |
| 第三章 人凝集素芯片用于分析精子表面糖基化 | 第67-83页 |
| 3.1 引言 | 第67-68页 |
| 3.2 实验材料试剂与仪器耗材 | 第68页 |
| 3.2.1 实验材料和试剂 | 第68页 |
| 3.2.2 实验仪器和耗材 | 第68页 |
| 3.3 实验方法 | 第68-73页 |
| 3.3.1 人凝集素芯片与人精子反应 | 第68-69页 |
| 3.3.2 流式细胞技术和免疫荧光染色验证人凝集素与精子的结合 | 第69-70页 |
| 3.3.3 人凝集素亲和捕获精子细胞糖蛋白 | 第70页 |
| 3.3.4 用LC-MS/MS分析与人凝集素特异性结合的糖蛋白 | 第70-72页 |
| 3.3.5 质谱数据处理 | 第72页 |
| 3.3.6 精子体外获能和顶体反应分析 | 第72-73页 |
| 3.4 结果和分析 | 第73-80页 |
| 3.4.1 固定精子与人凝集素芯片反应结果和分析 | 第73-74页 |
| 3.4.2 流式细胞和免疫荧光技术验证人凝集素与精子细胞结合结果和分析 | 第74-75页 |
| 3.4.3 质谱鉴定Galectin-1亲和捕获精子膜蛋白结果和分析 | 第75-78页 |
| 3.4.4 人凝集素Galectin-8促进精子体外获能的结果和分析 | 第78-80页 |
| 3.5 本章小结与讨论 | 第80-83页 |
| 第四章 植物凝集素芯片的完善和应用拓展 | 第83-104页 |
| 4.1 引言 | 第83-84页 |
| 4.2 实验材料试剂与仪器耗材 | 第84页 |
| 4.2.1 实验材料和试剂 | 第84页 |
| 4.2.2 实验仪器和耗材 | 第84页 |
| 4.3 实验方法 | 第84-93页 |
| 4.3.1 植物凝集素的选择以及点样溶液的制备 | 第85-86页 |
| 4.3.2 点样溶液转移到96孔板、384孔板中 | 第86-88页 |
| 4.3.3 制备植物凝集素芯片 | 第88-89页 |
| 4.3.4 植物凝集素芯片的固定和保存 | 第89-90页 |
| 4.3.5 植物凝集素芯片的质检 | 第90页 |
| 4.3.6 乳腺癌细胞组蛋白分离纯化 | 第90-91页 |
| 4.3.7 乳腺癌细胞外泌体分离纯化 | 第91页 |
| 4.3.8 外泌体粒度分析及抗体验证 | 第91-92页 |
| 4.3.9 荧光标记纯蛋白和复杂蛋白样品 | 第92-93页 |
| 4.3.10 蛋白质类样品或外泌体的芯片分析 | 第93页 |
| 4.4 结果和分析 | 第93-101页 |
| 4.4.1 植物凝集素芯片的质检结果和分析 | 第93-95页 |
| 4.4.2 植物凝集素芯片分析纯蛋白质糖基化结果和分析 | 第95-96页 |
| 4.4.3 植物凝集素芯片分析血清蛋白质糖基化结果和讨论 | 第96-97页 |
| 4.4.4 植物凝集素芯片分析外泌体糖基化结果和分析 | 第97-100页 |
| 4.4.5 植物凝集素芯片分析组蛋白糖基化结果和分析 | 第100-101页 |
| 4.5 本章小结与讨论 | 第101-104页 |
| 第五章 总结与展望 | 第104-110页 |
| 5.1 总结 | 第104-106页 |
| 5.2 本研究的创新点 | 第106页 |
| 5.3 凝集素芯片的特点和不足 | 第106-107页 |
| 5.4 展望 | 第107-110页 |
| 附录一 缩略词表 | 第110-113页 |
| 附录二 56种凝集素的购买信息及缩写表 | 第113-115页 |
| 附录三 主要溶液 | 第115-118页 |
| 附录四 主要仪器耗材 | 第118-119页 |
| 附录五 人凝集素和类人凝集素蛋白质列表 | 第119-121页 |
| 附录六 质谱结果 | 第121-126页 |
| 附录七 植物凝集素序号、名称缩写及对应的溶解缓冲液、点样缓冲液 | 第126-127页 |
| 附录八 56种植物凝集素及所识别的糖链 | 第127-128页 |
| 致谢 | 第128-130页 |
| 攻读博士学位期间主要研究成果及所获奖励 | 第130-132页 |
