| 摘要 | 第9-10页 |
| abstract | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第14-22页 |
| 1 诺如病毒的流行、传播及后果 | 第14-15页 |
| 2 诺如病毒的分类和遗传多样性 | 第15-16页 |
| 3 诺如病毒的组成和结构 | 第16-18页 |
| 4 诺如病毒的生命周期 | 第18-20页 |
| 5 诺如病毒的发病机制 | 第20页 |
| 6 诺如病毒疫苗研究现状及本课题的目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 诺如病毒GII.4 流行株主要衣壳蛋白VP1 抗原性漂变规律的研究 | 第22-49页 |
| 1 实验材料 | 第22-24页 |
| 1.1 试剂和耗材 | 第22-23页 |
| 1.2 仪器和设备 | 第23-24页 |
| 2 实验方法 | 第24-38页 |
| 2.1 GII.4 近期流行株VP1 蛋白的原核表达、纯化及鉴定 | 第24-32页 |
| 2.2 2012 VP1 单克隆抗体的制备、纯化及鉴定 | 第32-37页 |
| 2.3 EIA检测单克隆抗体与不同年份流行株衣壳蛋白的结合 | 第37页 |
| 2.4 诺如病毒GII.4 病毒株氨基酸突变位点的筛选 | 第37-38页 |
| 3 实验结果 | 第38-46页 |
| 3.1 GII.4 近期流行株VP1 蛋白的原核表达、纯化和鉴定结果 | 第38-40页 |
| 3.2 2012 VP1 单克隆抗体的制备、纯化及鉴定 | 第40-44页 |
| 3.3 EIA检测单克隆抗体与不同年份流行株衣壳蛋白的结合 | 第44-45页 |
| 3.4 诺如病毒GII.4 病毒株抗原漂变相关的氨基酸突变位点筛选 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-49页 |
| 第三章 诺如病毒衣壳蛋白VP1和VP2 的相互作用 | 第49-68页 |
| 1 实验材料 | 第49-50页 |
| 1.1 试剂和耗材 | 第49-50页 |
| 1.2 仪器和设备 | 第50页 |
| 2 实验方法 | 第50-54页 |
| 2.1 重组真核表达质粒的鉴定 | 第50-51页 |
| 2.2 构建293T真核表达体系 | 第51-52页 |
| 2.3 提取293T细胞总蛋白 | 第52-53页 |
| 2.4 Western Blots | 第53页 |
| 2.5 利用激光共聚焦显微镜观察细胞爬片 | 第53-54页 |
| 2.6 生物信息学分析 | 第54页 |
| 3 实验结果 | 第54-64页 |
| 3.1 重组真核表达质粒的双酶切鉴定 | 第54-56页 |
| 3.2 诺如病毒衣壳蛋白VP1和VP2在293T细胞中的表达 | 第56-58页 |
| 3.3 诺如病毒主要衣壳蛋白VP1 的亚细胞定位 | 第58-59页 |
| 3.4 诺如病毒次要衣壳蛋白VP2 的亚细胞定位 | 第59-61页 |
| 3.5 VP1 通过与VP2 的相互作用定位在细胞核上 | 第61-62页 |
| 3.6 核定位序列的生物信息学分析 | 第62-64页 |
| 4 讨论 | 第64-68页 |
| 第四章 诺如病毒VP2蛋白核定位序列的确定 | 第68-77页 |
| 1 实验材料 | 第68-69页 |
| 1.1 试剂和耗材 | 第68页 |
| 1.2 仪器和设备 | 第68-69页 |
| 2 实验方法 | 第69-70页 |
| 2.1 VP2 亚克隆及其突变体重组质粒的构建和鉴定 | 第69页 |
| 2.2 VP2 亚克隆及其突变体重组质粒的表达 | 第69页 |
| 2.3 利用激光共聚焦显微镜观察细胞爬片 | 第69-70页 |
| 3 实验结果 | 第70-74页 |
| 3.1 VP2 亚克隆及其突变体重组质粒的双酶切鉴定 | 第70-72页 |
| 3.2 激光共聚焦显微镜观察红色荧光蛋白的定位 | 第72-74页 |
| 4 讨论 | 第74-77页 |
| 第五章 结论 | 第77-79页 |
| 1 诺如病毒GII.4 流行株的抗原漂变的关键位点 | 第77页 |
| 2 主要衣壳蛋白VP1 和次要衣壳蛋白VP2 的相互作用促进衣壳蛋白的表达 | 第77页 |
| 3 次要衣壳蛋白VP2 具有核定位功能 | 第77页 |
| 4 主要衣壳蛋白VP1在VP2 的介导下定位在细胞核上 | 第77-78页 |
| 5 确定了VP2 的核定位序列 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-84页 |
| 附录 | 第84-93页 |
| 1 搜集的360 条诺如病毒序列及其基因分型 | 第84-92页 |
| 2 科研成果 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
