| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 符号与缩略语 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-23页 |
| 1 β-胡萝卜素概述 | 第15-19页 |
| 1.1 β-胡萝卜素的结构及理化性质 | 第15-16页 |
| 1.2 β-胡萝卜素的生理功能 | 第16页 |
| 1.3 β-胡萝卜素的应用及市场 | 第16-17页 |
| 1.4 p-胡萝卜素的来源 | 第17-19页 |
| 1.4.1 化学合成β-胡萝卜素 | 第17页 |
| 1.4.2 天然提取β-胡萝卜素 | 第17页 |
| 1.4.3 生物合成β-胡萝卜素 | 第17-19页 |
| 2 酿酒酵母生产p-胡萝卜素的研究进展 | 第19-21页 |
| 2.1 酿酒酵母生产β-胡萝卜素的优势 | 第19页 |
| 2.2 酿酒酵母合成β-胡萝卜素的代谢途径 | 第19-20页 |
| 2.3 酿酒酵母合成β-胡萝卜素的研究现状 | 第20-21页 |
| 3 立题依据及意义 | 第21-23页 |
| 3.1 抑制乙醇合成途径 | 第21-22页 |
| 3.2 降低麦角固醇合成量 | 第22页 |
| 3.3 优化培养 | 第22-23页 |
| 第二章 减少乙醇生成促进β-胡萝卜素合成 | 第23-39页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第23-26页 |
| 1.1 实验菌株及引物 | 第23-24页 |
| 1.1.1 实验菌株 | 第23页 |
| 1.1.2 实验引物 | 第23-24页 |
| 1.2 实验试剂 | 第24页 |
| 1.3 实验仪器 | 第24-25页 |
| 1.4 培养基及溶液配制 | 第25-26页 |
| 1.4.1 固体培养基 | 第25页 |
| 1.4.2 液体培养基 | 第25页 |
| 1.4.3 缓冲液 | 第25-26页 |
| 1.4.4 常备试剂 | 第26页 |
| 2 实验方法 | 第26-32页 |
| 2.1 C-A1工程菌株的构建方法 | 第26-29页 |
| 2.1.1 酿酒酵母中基因组DNA提取方法 | 第26-27页 |
| 2.1.2 引物设计 | 第27页 |
| 2.1.3 基因扩增 | 第27-28页 |
| 2.1.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第28页 |
| 2.1.5 酿酒酵母基因敲除方法 | 第28-29页 |
| 2.2 生长曲线测定 | 第29页 |
| 2.3 温度敏感性检测方法 | 第29页 |
| 2.4 菌体颜色观察 | 第29-30页 |
| 2.5 细胞形态及荧光观察 | 第30页 |
| 2.6 细胞直径计算 | 第30页 |
| 2.7 脂滴观察 | 第30页 |
| 2.8 发酵培养 | 第30-31页 |
| 2.9 发酵物质的检测 | 第31-32页 |
| 2.9.1 胡萝卜素的测定 | 第31页 |
| 2.9.2 乙醇的测定 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-37页 |
| 3.1 β-胡萝卜素在酵母细胞中的储存场所 | 第32-33页 |
| 3.2 敲除ADH1对菌体生长及细胞形态的影响 | 第33-35页 |
| 3.3 敲除ADH1对乙醇产量的影响 | 第35-36页 |
| 3.4 敲除ADH1对β-胡萝卜素产量的影响 | 第36-37页 |
| 4 本章小结与讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 降低麦角固醇含量促进β-胡萝卜素合成 | 第39-65页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第39-42页 |
| 1.1 实验菌株、引物及质粒 | 第39-40页 |
| 1.1.1 实验菌株 | 第39-40页 |
| 1.1.2 实验引物 | 第40页 |
| 1.1.3 实验质粒 | 第40页 |
| 1.2 实验试剂 | 第40页 |
| 1.3 实验仪器 | 第40页 |
| 1.4 培养基及溶液配制 | 第40-42页 |
| 1.4.1 固体培养基 | 第40-41页 |
| 1.4.2 液体培养基 | 第41页 |
| 1.4.3 缓冲液 | 第41-42页 |
| 1.4.4 常备试剂 | 第42页 |
| 1.4.5 YNB super powder预混固体粉 | 第42页 |
| 2 实验方法 | 第42-51页 |
| 2.1 C-E3、C-E4及C-E5工程菌株的构建方法 | 第42页 |
| 2.2 C-E3A1工程菌株的构建方法 | 第42-49页 |
| 2.2.1 E.coli DH5a感受态细胞的制备 | 第42-43页 |
| 2.2.2 构建pRS426-ERG3质粒 | 第43-46页 |
| 2.2.3 大肠杆菌电击转化 | 第46-47页 |
| 2.2.4 质粒DNA的提取 | 第47页 |
| 2.2.5 酵母转化 | 第47-48页 |
| 2.2.6 在已转化菌株中敲除基因ADH1 | 第48-49页 |
| 2.2.7 酿酒酵母中质粒剔除 | 第49页 |
| 2.3 生长曲线测定 | 第49-50页 |
| 2.4 温度敏感性检测 | 第50页 |
| 2.5 菌体颜色观察 | 第50页 |
| 2.6 细胞形态及荧光观察 | 第50页 |
| 2.7 细胞直径计算 | 第50页 |
| 2.8 发酵培养 | 第50页 |
| 2.9 发酵物质的检测 | 第50-51页 |
| 2.9.1 β-胡萝卜素的测定 | 第50页 |
| 2.9.2 麦角固醇的测定 | 第50-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-62页 |
| 3.1 分别敲除ERG3、ERG4及ERG5对β-胡萝卜素合成的影响 | 第51-55页 |
| 3.1.1 分别敲除ERG3、ERG4及ERG5对菌体生长及细胞形态的影响 | 第51-52页 |
| 3.1.2 分别敲除ERG3、ERG4及ERG5对麦角固醇含量的影响 | 第52-53页 |
| 3.1.3 分别敲除ERG3、ERG4及ERG5对β-胡萝卜素产量的影响 | 第53-55页 |
| 3.2 双敲除ERG3和ADH1对β-胡萝卜素合成的影响 | 第55-62页 |
| 3.2.1 C-E3A1工程菌株的构建 | 第55-59页 |
| 3.2.2 双敲除ADH1及ERG3对麦角固醇含量的影响 | 第59-60页 |
| 3.2.3 双敲除ADH1及ERG3对β-胡萝卜素产量的影响 | 第60-62页 |
| 4 本章小结与讨论 | 第62-65页 |
| 第四章 培养优化:氮素饥饿促进β-胡萝卜素合成 | 第65-73页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第65-66页 |
| 1.1 实验菌株、质粒及引物 | 第65-66页 |
| 1.2 实验试剂 | 第66页 |
| 1.3 实验仪器 | 第66页 |
| 1.4 培养基及溶液配制 | 第66页 |
| 2 实验方法 | 第66-67页 |
| 2.1 发酵培养 | 第66-67页 |
| 2.2 脂滴观察 | 第67页 |
| 2.3 发酵物质的检测 | 第67页 |
| 3 结果与分析 | 第67-70页 |
| 3.1 氮素饥饿对酵母细胞脂质的影响 | 第67-68页 |
| 3.2 氮素饥饿对麦角固醇合成的影响 | 第68-69页 |
| 3.3 氮素饥饿对β-胡萝卜素合成的影响 | 第69-70页 |
| 4 本章小结与讨论 | 第70-73页 |
| 全文总结 | 第73-75页 |
| 不足之处及展望 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
