| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-22页 |
| 1.1 纤维素酶 | 第10-14页 |
| 1.1.1 纤维素酶的来源 | 第10-11页 |
| 1.1.2 纤维素酶的结构 | 第11-13页 |
| 1.1.3 纤维素酶的作用机制 | 第13-14页 |
| 1.2 外切葡聚糖酶 | 第14-17页 |
| 1.2.1 外切葡聚糖酶的结构及性质 | 第14-15页 |
| 1.2.2 外切葡聚糖酶的研究现状及发展趋势 | 第15-17页 |
| 1.3 粗糙脉孢菌降解纤维素方面的应用 | 第17-20页 |
| 1.3.1 漆酶对木质素的降解 | 第17-18页 |
| 1.3.2 纤维素酶对纤维素的降解 | 第18-19页 |
| 1.3.3 半纤维素酶对半纤维素的降解 | 第19-20页 |
| 1.4 课题研究的目的意义及技术路线 | 第20-22页 |
| 1.4.1 课题研究的目的意义 | 第20-21页 |
| 1.4.2 课题研究的技术路线 | 第21-22页 |
| 第2章 材料与方法 | 第22-38页 |
| 2.1 试验材料 | 第22-26页 |
| 2.1.1 试验用菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 主要药品及试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 培养基及常用试剂的配制 | 第22-25页 |
| 2.1.4 仪器和设备 | 第25-26页 |
| 2.2 试验方法 | 第26-38页 |
| 2.2.1 酶活力的测定方法 | 第26-28页 |
| 2.2.2 粗糙脉孢菌纤维素酶突变体的筛选方法 | 第28页 |
| 2.2.3 粗糙脉孢菌基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.4 粗糙脉孢菌NCU07340基因的PCR扩增 | 第29页 |
| 2.2.5 CBHⅠ基因的载体构建 | 第29-32页 |
| 2.2.6 电穿孔转化粗糙脉孢菌301-6菌株 | 第32-33页 |
| 2.2.7 CBHⅠ的Westernblotting检测 | 第33-36页 |
| 2.2.8 胞内酶的SDS-PAGE | 第36页 |
| 2.2.9 CHBⅠ的分离纯化 | 第36页 |
| 2.2.10 菌株在固体产酶培养基上的生长表型 | 第36-37页 |
| 2.2.11 培养基成分对过表达菌株产酶的影响 | 第37页 |
| 2.2.12 酶最适反应温度及热稳定性 | 第37页 |
| 2.2.13 酶最适反应pH值及酸碱稳定性 | 第37页 |
| 2.2.14 金属离子对酶活性的影响 | 第37-38页 |
| 第3章 结果与分析 | 第38-52页 |
| 3.1 纤维素酶突变体的筛选 | 第38-40页 |
| 3.2 粗糙脉孢菌CHBⅠ基因的载体构建 | 第40-43页 |
| 3.2.1 CHBⅠ基因的克隆 | 第40页 |
| 3.2.2 PCR产物的酶切 | 第40-41页 |
| 3.2.3 筛选阳性克隆子并验证 | 第41-42页 |
| 3.2.4 粗糙脉孢菌CBH的基因载体 | 第42-43页 |
| 3.3 粗糙脉孢菌CBHⅠ基因的过表达 | 第43-45页 |
| 3.3.1 Western杂交检验 | 第43页 |
| 3.3.2 过表达CBHⅠ基因菌株表达纤维素酶活力 | 第43-45页 |
| 3.4 过表达菌株产生纤维素酶作用性质分析结果 | 第45-52页 |
| 3.4.1 菌株在固体产酶培养基上的生长表型对比 | 第45-46页 |
| 3.4.2 不同培养基成分对过表达菌株产酶情况的影响 | 第46-47页 |
| 3.4.3 CBHⅠ的酶学性质 | 第47-52页 |
| 第4章 讨论 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
