| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 主要符号表 | 第11-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-17页 |
| 1.1 鳗鲡养殖相关疾病与病原 | 第12页 |
| 1.2 鱼类疫苗研究概况 | 第12-14页 |
| 1.3 鱼类致病性弧菌与气单胞菌重组外膜蛋白(OMPS)的免疫原性研究 | 第14-15页 |
| 1.4 本研究的内容和意义 | 第15-17页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第15页 |
| 1.4.2 研究意义 | 第15-17页 |
| 第2章 鳗鲡病原性创伤弧菌与嗜水气单胞菌二联外膜蛋白基因表达载体的构建、表达与纯化 | 第17-49页 |
| 2.1 材料与方法 | 第17-28页 |
| 2.1.1 仪器与试剂 | 第17-20页 |
| 2.1.2 菌株 | 第20页 |
| 2.1.3 细菌培养与DNA模板的制备 | 第20-21页 |
| 2.1.4 病原性弧菌和气单胞菌外膜蛋白基因序列的检索、筛选与比对 | 第21页 |
| 2.1.5 病原性创伤弧菌和嗜水气单胞菌外膜蛋白基因引物设计与PCR扩增 | 第21页 |
| 2.1.6 病原性创伤弧菌和嗜水气单胞菌外膜蛋白全基因的测序与比对分析 | 第21-22页 |
| 2.1.7 病原性创伤弧菌和嗜水气单胞菌外膜蛋白全基因的结构与免疫原性分析预测 | 第22页 |
| 2.1.8 双基因的连接 | 第22-23页 |
| 2.1.9 重组表达载体的构建 | 第23-25页 |
| 2.1.10 重组质粒的筛选和鉴定 | 第25-26页 |
| 2.1.11 双基因G-Vibrio-Arom的亲水性、免疫原性分析与蛋白质结构预测 | 第26页 |
| 2.1.12 OMP-Vibrio-Arom的原核表达 | 第26-27页 |
| 2.1.13 OMP-Vibrio-Arom蛋白的纯化 | 第27-28页 |
| 2.1.14 蛋白冻干浓缩 | 第28页 |
| 2.2 结果 | 第28-46页 |
| 2.2.1 病原性气单胞菌和弧菌外膜蛋白基因参考序列的比对与系统发育分析 | 第28-31页 |
| 2.2.2 病原性创伤弧菌和嗜水气单胞菌外膜蛋白基因全长的PCR扩增及测序 | 第31页 |
| 2.2.3 PCR扩增鳗鲡病原性创伤弧菌(B82)和嗜水气单胞菌(B11)外膜蛋白基因表达产物的结构与功能分析 | 第31-35页 |
| 2.2.4 基因连接、双酶切及重组质粒鉴定 | 第35-38页 |
| 2.2.5 连接基因G-Vibrio-Arom推测的融合表达产物结构和免疫原性预测结果 | 第38-43页 |
| 2.2.6 OMP-Vibrio-Arom的诱导表达 | 第43-45页 |
| 2.2.7 目的蛋白(OMP-Vibrio-Arom)的纯化、复性与蛋白含量测定 | 第45-46页 |
| 2.3 讨论 | 第46-49页 |
| 2.3.1 创伤弧菌和嗜水气单胞菌外膜蛋白基因的筛选 | 第46-47页 |
| 2.3.2 创伤弧菌和嗜水气单胞菌外膜蛋白基因的连接 | 第47页 |
| 2.3.3 表达载体的构建 | 第47页 |
| 2.3.4 重组蛋白表达条件的选择 | 第47-48页 |
| 2.3.5 重组融合蛋白纯化方法的改进 | 第48-49页 |
| 第3章 鳗鲡病原性创伤弧菌与嗜水气单胞菌外膜蛋白基因二联表达产物的免疫原性研究 | 第49-60页 |
| 3.1 材料与方法 | 第50-52页 |
| 3.1.1 试验鳗鲡和菌株 | 第50页 |
| 3.1.2 主要试剂及其配制 | 第50页 |
| 3.1.3 灭活菌液和外膜蛋白基因工程表达产物 | 第50-51页 |
| 3.1.4 鳗鲡养殖、分组及免疫 | 第51页 |
| 3.1.5 样品的采集 | 第51页 |
| 3.1.6 鳗鲡血细胞的培养与转化实验 | 第51页 |
| 3.1.7 鳗鲡血清中抗体水平的ELISA检测 | 第51-52页 |
| 3.1.8 鳗鲡血清、粘液和肝肾悬液溶菌酶含量的测定 | 第52页 |
| 3.1.9 攻毒感染与免疫保护率的测定 | 第52页 |
| 3.1.10 数据统计与分析 | 第52页 |
| 3.2 结果 | 第52-58页 |
| 3.2.1 攻毒感染相对保护率 | 第52-54页 |
| 3.2.2 细胞转化 | 第54页 |
| 3.2.3 血清特异性抗体效价 | 第54-55页 |
| 3.2.4 血清、粘液和肝肾组织悬液溶菌酶含量 | 第55-58页 |
| 3.3 讨论 | 第58-60页 |
| 第4章 总结与展望 | 第60-62页 |
| 4.1 论文主要成果 | 第60-61页 |
| 4.2 论文主要创新点及展望 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 附录 | 第68-69页 |
| 在学期间发表的学术论文 | 第69页 |
