| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1. 前言 | 第11-26页 |
| 1.1 线虫的危害与防治 | 第11-12页 |
| 1.2 微生物侵染线虫 | 第12-15页 |
| 1.2.1 微生物侵染线虫研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2.2 细菌致线虫死亡机制 | 第14-15页 |
| 1.3 丁香假单胞菌MB03与秀丽隐杆线虫 | 第15-17页 |
| 1.3.1 丁香假单胞菌MB03简介 | 第15-16页 |
| 1.3.2 秀丽隐杆线虫简介 | 第16-17页 |
| 1.4 转座子Tn5的背景 | 第17-22页 |
| 1.4.1 转座的概念 | 第17页 |
| 1.4.2 转座子分类 | 第17页 |
| 1.4.3 转座过程 | 第17-18页 |
| 1.4.4 转座子Tn5介绍 | 第18-20页 |
| 1.4.5 转座子的实际应用 | 第20-22页 |
| 1.5 转座子插入位点鉴定方法 | 第22-25页 |
| 1.5.1 质粒拯救法 | 第22页 |
| 1.5.2 反向PCR法 | 第22-23页 |
| 1.5.3 接头法 | 第23页 |
| 1.5.4 直接测序法 | 第23页 |
| 1.5.5 hiTAIL-PCR法 | 第23-25页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第25-26页 |
| 2. 材料与方法 | 第26-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-36页 |
| 2.1.1 质粒与菌株 | 第26-29页 |
| 2.1.2 线虫 | 第29页 |
| 2.1.3 培养基与培养条件 | 第29-30页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第30-33页 |
| 2.1.5 实验主要仪器 | 第33-34页 |
| 2.1.6 引物 | 第34-36页 |
| 2.2 实验方法 | 第36-52页 |
| 2.2.1 技术路线 | 第36页 |
| 2.2.2 突变文库的构建 | 第36-38页 |
| 2.2.3 目的菌株的筛选 | 第38页 |
| 2.2.4 PCR扩增 | 第38-39页 |
| 2.2.5 hiTAIL-PCR | 第39-41页 |
| 2.2.6 琼脂糖凝胶电泳及产物回收 | 第41页 |
| 2.2.7 大肠杆菌质粒提取 | 第41-42页 |
| 2.2.8 酶切、酶连 | 第42-43页 |
| 2.2.9 感受态的制备 | 第43-44页 |
| 2.2.10 转化及筛选 | 第44-45页 |
| 2.2.11 蛋白诱导与纯化 | 第45-46页 |
| 2.2.12 SDS-PAGE | 第46-47页 |
| 2.2.13 秀丽隐杆线虫的饲养及同步化 | 第47-48页 |
| 2.2.14 秀丽隐杆线虫相关生测实验 | 第48-50页 |
| 2.2.15 基于固体培养基上的线虫生测实验 | 第50-52页 |
| 3. 结果与分析 | 第52-82页 |
| 3.1 线虫毒性相关基因的筛选及鉴定 | 第52-65页 |
| 3.1.1 丁香假单胞菌MB03突变文库中对线虫毒性减弱突变株的筛选 | 第52页 |
| 3.1.2 转座子插入位点的鉴定 | 第52-54页 |
| 3.1.3 转座子插入位点序列的信息分析 | 第54-65页 |
| 3.2 丁香假单胞菌对秀丽隐杆线虫生物活性影响的测定 | 第65-71页 |
| 3.2.1 线虫取食偏好性测定 | 第65-66页 |
| 3.2.2 运动轨迹影响的测定 | 第66-67页 |
| 3.2.3 生长影响的测定 | 第67-68页 |
| 3.2.4 产卵率影响的测定 | 第68-69页 |
| 3.2.5 肠道定殖率测定 | 第69-71页 |
| 3.2.6 取食抑制的测定 | 第71页 |
| 3.3 线虫毒性相关基因的扩增及重组菌的构建 | 第71-82页 |
| 3.3.1 相关基因的扩增 | 第72页 |
| 3.3.2 表达载体的构建 | 第72-74页 |
| 3.3.3 补偿及增效载体的构建 | 第74-78页 |
| 3.3.4 目的蛋白的诱导 | 第78页 |
| 3.3.5 工程菌对秀丽隐杆线虫生物活性影响的测定 | 第78-82页 |
| 4. 总结与讨论 | 第82-87页 |
| 4.1 总结 | 第82-84页 |
| 4.2 讨论 | 第84-85页 |
| 4.2.1 Tn5转座子插入位点的鉴定 | 第84页 |
| 4.2.2 丁香假单胞菌MB03中杀线虫相关蛋白 | 第84-85页 |
| 4.3 展望 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
