| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-24页 |
| 1.1 热休克蛋白研究概况 | 第13页 |
| 1.2 小热休克蛋白研究进展 | 第13-22页 |
| 1.2.1 小热休克蛋白的种类 | 第13-14页 |
| 1.2.2 小热休克蛋白的结构特征 | 第14-16页 |
| 1.2.3 小热休克蛋白的生物学功能 | 第16-20页 |
| 1.2.3.1 小热休克蛋白的分子伴侣功能 | 第16-18页 |
| 1.2.3.2 小热休克蛋白与植物生长发育相关 | 第18页 |
| 1.2.3.3 小热休克蛋白增加植物的抗逆性 | 第18-19页 |
| 1.2.3.4 小热休克蛋白参与生物逆境胁迫 | 第19-20页 |
| 1.2.4 小热休克蛋白基因的表达调控 | 第20-22页 |
| 1.2.4.1 小热休克蛋白的表达 | 第20-21页 |
| 1.2.4.2 小热休克蛋白基因调控 | 第21-22页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第2章 本氏烟中SHSPs基因家族的鉴定 | 第24-37页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 材料与方法 | 第24-25页 |
| 2.2.1 方法 | 第24-25页 |
| 2.2.1.1 SHSPs家族基因序列的搜索和鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.1.2 SHSPs家族基因的结构特征分析 | 第25页 |
| 2.2.1.3 SHSPs基因构建系统进化树 | 第25页 |
| 2.2.1.4 SHSPs启动子预测 | 第25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-35页 |
| 2.3.1 SHSPs家族基因的鉴定及其基本信息 | 第25-26页 |
| 2.3.2 SHSPs家族基因的结构特征分析 | 第26页 |
| 2.3.3 启动子序列分析 | 第26-32页 |
| 2.3.4 氨基酸序列分析 | 第32-33页 |
| 2.3.5 系统进化分析 | 第33-35页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第35-37页 |
| 第3章 本氏烟SHSPs基因的表达模式及启动子活性分析 | 第37-62页 |
| 3.1 引言 | 第37-38页 |
| 3.2 材料与方法 | 第38-48页 |
| 3.2.1 材料 | 第38页 |
| 3.2.2 方法 | 第38-48页 |
| 3.2.2.1 实验材料处理 | 第38-39页 |
| 3.2.2.2 Real-time PCR设计引物 | 第39-42页 |
| 3.2.2.3 RNA提取—Trizol法提取植物组织总RNA | 第42页 |
| 3.2.2.4 cDNA合成 | 第42-43页 |
| 3.2.2.5 实时荧光定量PCR | 第43页 |
| 3.2.2.6 Northern blot检测SHSPs表达量变化 | 第43-44页 |
| 3.2.2.7 目的基因的扩增与纯化 | 第44-45页 |
| 3.2.2.8 载体的线性化处理 | 第45页 |
| 3.2.2.9 重组载体的构建 | 第45-46页 |
| 3.2.2.10 重组载体转化大肠杆菌 | 第46页 |
| 3.2.2.11 阳性克隆鉴定 | 第46页 |
| 3.2.2.12 根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第46-47页 |
| 3.2.2.13 重组质粒转化农杆菌感受态 | 第47页 |
| 3.2.2.14 农杆菌浸润接种 | 第47-48页 |
| 3.2.2.15 GUS染色 | 第48页 |
| 3.2.2.16 GUS活性测定 | 第48页 |
| 3.2.2.17 总蛋白含量的测定 | 第48页 |
| 3.3 结果与分析 | 第48-59页 |
| 3.3.1 本氏烟SHSPs基因的组织特异性表达分析 | 第48-50页 |
| 3.3.2 非生物胁迫下本氏烟SHSPs基因的表达模式分析 | 第50-53页 |
| 3.3.2.1 本氏烟SHSPs家族不同成员在高温胁迫下的表达模式分析 | 第50-52页 |
| 3.3.2.2 本氏烟SHSPs家族不同成员在干旱胁迫下的表达模式分析 | 第52-53页 |
| 3.3.3 激素处理下本氏烟SHSPs基因的表达模式分析 | 第53-55页 |
| 3.3.3.1 本氏烟SHSPs家族不同成员在ABA处理下的表达模式分析 | 第53-54页 |
| 3.3.3.2 本氏烟SHSPs家族不同成员在SA处理下的表达模式分析 | 第54-55页 |
| 3.3.4 植物病毒侵染胁迫下本氏烟SHSPs基因的表达模式分析 | 第55-57页 |
| 3.3.4.1 本氏烟SHSPs家族不同成员在不同病毒侵染10 d后的表达模式分析 | 第55-56页 |
| 3.3.4.2 受四种病毒侵染共同诱导的6个SHSPs基因表达模式分析 | 第56-57页 |
| 3.3.5 本氏烟SHSPs启动子活性分析 | 第57-59页 |
| 3.3.5.1 本氏烟3个SHSPs启动子活性分析 | 第57页 |
| 3.3.5.2 RSV侵染本氏烟后3个SHSPs启动子活性分析 | 第57-59页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第59-62页 |
| 3.4.1 本氏烟SHSPs的组织特异性表达分析 | 第59页 |
| 3.4.2 非生物胁迫下本氏烟SHSPs的表达模式分析 | 第59-60页 |
| 3.4.3 病毒胁迫下本氏烟SHSPs的表达模式分析 | 第60-61页 |
| 3.4.4 本氏烟SHSPs启动子活性分析 | 第61-62页 |
| 第4章 本氏烟SHSPs的功能初步分析 | 第62-78页 |
| 4.1 引言 | 第62页 |
| 4.2 材料与方法 | 第62-69页 |
| 4.2.1 材料 | 第62-63页 |
| 4.2.2 方法 | 第63-69页 |
| 4.2.2.1 设计引物 | 第63-64页 |
| 4.2.2.2 目的基因的扩增与纯化 | 第64页 |
| 4.2.2.3 克隆载体构建 | 第64-65页 |
| 4.2.2.3.1 纯化片段连接T-载体 | 第64页 |
| 4.2.2.3.2 连接产物转化大肠杆菌 | 第64页 |
| 4.2.2.3.3 筛选阳性克隆测序并提取质粒 | 第64-65页 |
| 4.2.2.4 原核表达载体及亚细胞定位载体构建 | 第65页 |
| 4.2.2.4.1 双酶切及连接反应 | 第65页 |
| 4.2.2.4.2 重组质粒转化大肠杆菌 | 第65页 |
| 4.2.2.5 SHSPs诱导表达 | 第65-66页 |
| 4.2.2.6 Western blot检测表达蛋白 | 第66页 |
| 4.2.2.7 分子伴侣活性测定 | 第66-67页 |
| 4.2.2.8 低温包埋 | 第67页 |
| 4.2.2.9 胶体金间接标记 | 第67页 |
| 4.2.2.10 电镜观察拍照 | 第67-68页 |
| 4.2.2.11 本氏烟遗传转化 | 第68页 |
| 4.2.2.12 转基因植株的PCR阳性鉴定 | 第68-69页 |
| 4.2.2.13 RNA提取--Trizol法提取植物叶片总RNA | 第69页 |
| 4.2.2.14 cDNA合成 | 第69页 |
| 4.2.2.15 实时荧光定量PCR | 第69页 |
| 4.2.2.16 转基因植株种子萌发率测定 | 第69页 |
| 4.3 结果与分析 | 第69-76页 |
| 4.3.1 本氏烟HSP-07与HSP-34原核表达及蛋白纯化 | 第69-71页 |
| 4.3.2 Western blot检测表达蛋白 | 第71-72页 |
| 4.3.3 本氏烟HSP07与HSP34的体外分子伴侣活性分析 | 第72页 |
| 4.3.4 本氏烟HSP-07的亚细胞定位分析 | 第72-73页 |
| 4.3.5 过表达HSP-07本氏烟植株的阳性鉴定 | 第73-74页 |
| 4.3.6 转基因植株种子萌发率的测定 | 第74-75页 |
| 4.3.7 转基因植株根长的测定 | 第75-76页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第76-78页 |
| 第5章 总结与展望 | 第78-80页 |
| 5.1 总结 | 第78-79页 |
| 5.2 展望 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-88页 |
| 附录 | 第88-96页 |
| 致谢 | 第96-98页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第98-102页 |
