| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 第一章 绪论 | 第22-50页 |
| 1.1 固定化酶 | 第22-31页 |
| 1.1.1 概述 | 第22-23页 |
| 1.1.2 固定化酶的制备方法 | 第23-28页 |
| 1.1.2.1 传统固定化方法 | 第23-25页 |
| 1.1.2.2 生物亲和固定化方法 | 第25-28页 |
| 1.1.3 多酶共固定化 | 第28-31页 |
| 1.2 DNA介导固定化技术 | 第31-39页 |
| 1.2.1 DNA介导固定化技术的发展和概述 | 第31-33页 |
| 1.2.2 DDI技术的特点和优势 | 第33页 |
| 1.2.3 DDI技术的应用 | 第33-39页 |
| 1.3 磁性纳米粒子 | 第39-42页 |
| 1.3.1 磁性纳米粒子的制备 | 第39-41页 |
| 1.3.2 磁性纳米粒子的表面功能化 | 第41-42页 |
| 1.4 多巴胺 | 第42-47页 |
| 1.4.1 多巴胺及其衍生物 | 第43-44页 |
| 1.4.2 聚多巴胺 | 第44-47页 |
| 1.5 课题的提出及研究内容 | 第47-50页 |
| 第二章 DNA互补介导固定化碱性磷酸酶的制备及其在抑制剂分析中的应用 | 第50-70页 |
| 2.1 引言 | 第50-51页 |
| 2.2 实验部分 | 第51-58页 |
| 2.2.1 主要实验试剂 | 第51-52页 |
| 2.2.2 主要实验仪器 | 第52-53页 |
| 2.2.3 固定化碱性磷酸的制备 | 第53-56页 |
| 2.2.3.1 APTES@SiO_2@Fe_3O_4的制备 | 第54-55页 |
| 2.2.3.2 sspDNA-MNP的制备 | 第55-56页 |
| 2.2.3.3 sscDNA-ALP复合物的制备 | 第56页 |
| 2.2.3.4 通过DNA杂交固定化ALP | 第56页 |
| 2.2.4 ALP-DNA-MNP的性质研究 | 第56-58页 |
| 2.2.4.1 DNA链长对ALP-DNA-MNP活性的影响 | 第56-57页 |
| 2.2.4.2 反应条件对ALP-DNA-MNP酶解效率的影响 | 第57页 |
| 2.2.4.3 ALP-DNA-MNP的可逆性考察 | 第57-58页 |
| 2.2.5 ALP-DNA-MNP用于抑制剂分析研究 | 第58页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第58-69页 |
| 2.3.1 DNA介导固定化碱性磷酸酶的表征 | 第58-62页 |
| 2.3.1.1 CLSM表征结果 | 第58-59页 |
| 2.3.1.2 HPLC表征结果 | 第59-60页 |
| 2.3.1.3 TGA表征结果 | 第60-61页 |
| 2.3.1.4 VSM表征结果 | 第61-62页 |
| 2.3.2 DNA链长度对ALP-DNA-MNP酶解效率的影响 | 第62-63页 |
| 2.3.3 ALP-DNA-MNP酶解条件的优化 | 第63-65页 |
| 2.3.3.1 酶解温度的优化 | 第63页 |
| 2.3.3.2 pH的优化 | 第63页 |
| 2.3.3.3 酶解时间的优化 | 第63-64页 |
| 2.3.3.4 底物浓度的优化 | 第64-65页 |
| 2.3.4 米氏常数的测定 | 第65-66页 |
| 2.3.5 ALP-DNA-MNP的可逆性考察 | 第66页 |
| 2.3.6 ALP-DNA-MNP抑制动力学分析 | 第66-69页 |
| 2.4 小结 | 第69-70页 |
| 第三章 聚多巴胺修饰的磁珠用于DNA介导固定化胰蛋白酶的制备及在蛋白质分析中的应用 | 第70-94页 |
| 3.1 引言 | 第70-71页 |
| 3.2 实验部分 | 第71-79页 |
| 3.2.1 主要实验试剂 | 第71-72页 |
| 3.2.2 主要实验仪器 | 第72-73页 |
| 3.2.3 PDA@MNP的制备 | 第73页 |
| 3.2.4 pDNA@PDA@MNP的制备 | 第73页 |
| 3.2.5 cDNA-Try复合物的制备 | 第73-74页 |
| 3.2.6 FITC标记的胰蛋白酶的制备 | 第74页 |
| 3.2.7 Try@DPDA@MNP的制备 | 第74页 |
| 3.2.8 戊二醛交联法制备固定化胰蛋白酶 | 第74-75页 |
| 3.2.9 固定化Try固载量的测定 | 第75页 |
| 3.2.10 固定化酶和游离酶酶学性质的考察 | 第75-77页 |
| 3.2.10.1 溶液的配制 | 第76页 |
| 3.2.10.2 酶解条件的优化 | 第76页 |
| 3.2.10.3 酶动力学性质的考察 | 第76-77页 |
| 3.2.10.4 Try@DPDA@MNP可逆性的考察 | 第77页 |
| 3.2.11 蛋白质样品的酶解 | 第77-79页 |
| 3.2.11.1 标准蛋白质样品的前处理 | 第77页 |
| 3.2.11.2 标准蛋白的酶解 | 第77-78页 |
| 3.2.11.3 MALDI-TOF-MS质谱分析 | 第78-79页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第79-93页 |
| 3.3.1 DNA介导固定化胰蛋白酶的表征 | 第79-84页 |
| 3.3.1.1 TEM表征结果 | 第80页 |
| 3.3.1.2 FTIR表征结果 | 第80-81页 |
| 3.3.1.3 CLSM表征结果 | 第81-82页 |
| 3.3.1.4 TGA表征结果 | 第82-83页 |
| 3.3.1.5 VSM表征结果 | 第83-84页 |
| 3.3.2 酶解条件的优化 | 第84-85页 |
| 3.3.3 酶的动力学性质考察 | 第85-87页 |
| 3.3.4 稳定性和重复使用性考察 | 第87-90页 |
| 3.3.5 可逆性考察 | 第90-91页 |
| 3.3.6 标准蛋白质样品的水解 | 第91-93页 |
| 3.4 小结 | 第93-94页 |
| 第四章 多官能化磁性纳米粒子用于DNA介导固定化多酶系统的构建及酶学性质研究 | 第94-122页 |
| 4.1 引言 | 第94-95页 |
| 4.2 实验部分 | 第95-103页 |
| 4.2.1 主要实验试剂 | 第95-96页 |
| 4.2.2 主要实验仪器 | 第96-97页 |
| 4.2.3 MPs的制备 | 第97页 |
| 4.2.4 马来酰亚胺基多巴胺衍生物(MA)的制备 | 第97页 |
| 4.2.5 多巴胺及其衍生物修饰的功能化磁性纳米粒子的制备 | 第97-98页 |
| 4.2.5.1 DA或MA修饰的磁性纳米粒子的制备 | 第97页 |
| 4.2.5.2 DA和MA修饰的多功能化磁性纳米粒子的制备 | 第97-98页 |
| 4.2.6 探针DNA修饰的多官能化磁性纳米粒子的制备 | 第98-99页 |
| 4.2.6.1 P1-P2@DM@MP的制备 | 第98页 |
| 4.2.6.2 P2-P1@DM@MP的制备 | 第98页 |
| 4.2.6.3 [P1-P2]@DM@MP的制备 | 第98-99页 |
| 4.2.7 DNA-酶复合物的制备 | 第99页 |
| 4.2.8 用荧光素对目标酶进行标记 | 第99页 |
| 4.2.9 多酶共固定化催化体系的构建 | 第99-100页 |
| 4.2.10 戊二醛交联法共固定化GO_x和HRP | 第100页 |
| 4.2.11 固定化GO_x-HRP固载量的测定 | 第100-101页 |
| 4.2.12 共固定化多酶催化体系的性质考察 | 第101-103页 |
| 4.2.12.1 溶液的配制 | 第101页 |
| 4.2.12.2 探针DNA的固定化顺序对酶解效果的影响 | 第101页 |
| 4.2.12.3 温度和pH对酶解效果的影响 | 第101-102页 |
| 4.2.12.4 固定化酶和游离酶的动力学性质考察 | 第102页 |
| 4.2.12.5 GO_x-HRP@DM@MP的可逆性考察 | 第102-103页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第103-120页 |
| 4.3.1 多巴胺及其衍生物修饰的功能化磁性纳米粒子的合成条件考察和表征 | 第103-107页 |
| 4.3.1.1 表征结果 | 第103-106页 |
| 4.3.1.2 合成条件考察 | 第106-107页 |
| 4.3.2 DDI介导共固定化多酶体系的合成条件考察和表征 | 第107-111页 |
| 4.3.2.1 表征结果 | 第107-109页 |
| 4.3.2.2 合成条件考察 | 第109-111页 |
| 4.3.3 GO_x-HRP@DM@MP酶解条件的优化 | 第111-112页 |
| 4.3.4 调控并优化GO_x和HRP的固定化比例 | 第112-114页 |
| 4.3.5 固定化酶和游离酶的动力学性质考察 | 第114-117页 |
| 4.3.6 GO_x-HRP@DM@MP的可逆性考察 | 第117-118页 |
| 4.3.7 稳定性和重复使用性的考察 | 第118-120页 |
| 4.4 小结 | 第120-122页 |
| 第五章 主要结论与创新点 | 第122-124页 |
| 5.1 主要结论 | 第122-123页 |
| 5.2 创新点 | 第123-124页 |
| 参考文献 | 第124-138页 |
| 研究成果及其发表的学术论文 | 第138-140页 |
| 致谢 | 第140-142页 |
| 作者及其导师简介 | 第142-143页 |
| 附件 | 第143-144页 |
