| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第16-32页 |
| 1.1 甘胆酸的研究进展 | 第16-21页 |
| 1.1.1 胆汁酸的概述 | 第16页 |
| 1.1.2 甘胆酸的结构及其理化性质 | 第16-17页 |
| 1.1.3 甘胆酸的简介 | 第17页 |
| 1.1.4 甘胆酸的检测对疾病诊断的意义 | 第17-18页 |
| 1.1.5 甘胆酸检测方法的研究进展 | 第18-21页 |
| 1.2 小分子化合物特异性抗体的研究概述 | 第21-29页 |
| 1.2.1 多克隆抗体 | 第22-23页 |
| 1.2.2 单克隆抗体 | 第23页 |
| 1.2.3 基因工程抗体 | 第23-29页 |
| 1.3 主要研究内容和意义 | 第29-32页 |
| 1.3.1 研究内容 | 第29-30页 |
| 1.3.2 研究意义 | 第30-31页 |
| 1.3.3 技术路线 | 第31-32页 |
| 第二章 甘胆酸特异单链抗体的筛选 | 第32-64页 |
| 2.1 引言 | 第32-33页 |
| 2.2 实验材料 | 第33-37页 |
| 2.2.1 仪器及耗材 | 第33页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第33-35页 |
| 2.2.3 菌株和载体 | 第35页 |
| 2.2.4 实验动物 | 第35页 |
| 2.2.5 引物 | 第35页 |
| 2.2.6 主要缓冲液及培养基 | 第35-37页 |
| 2.3 实验方法 | 第37-55页 |
| 2.3.1 甘胆酸半抗原的合成 | 第37-38页 |
| 2.3.2 甘胆酸免疫原和包被原的合成 | 第38-40页 |
| 2.3.3 动物免疫 | 第40-41页 |
| 2.3.4 单链抗体基因的扩增 | 第41-47页 |
| 2.3.5 载体pComb3x和单链抗体基因片段的酶切反应 | 第47-48页 |
| 2.3.6 载体pComb3x和单链抗体基因片段的连接 | 第48-49页 |
| 2.3.7 载体pComb3x和单链抗体基因片段连接产物的电转化 | 第49页 |
| 2.3.8 单链抗体噬菌体展示文库的构建 | 第49-51页 |
| 2.3.9 单链抗体噬菌体展示文库的淘选 | 第51-52页 |
| 2.3.10 淘选结果的评估 | 第52-53页 |
| 2.3.11 特异性单链抗体阳性克隆的筛选 | 第53-54页 |
| 2.3.12 噬菌粒的提取 | 第54页 |
| 2.3.13 噬菌粒的测序 | 第54-55页 |
| 2.4 实验结果 | 第55-61页 |
| 2.4.1 抗体轻链可变区和重链可变区及单链抗体基因的扩增 | 第55-56页 |
| 2.4.2 单链抗体噬菌体文库的构建及鉴定 | 第56-57页 |
| 2.4.3 单链抗体噬菌体文库的亲和淘选 | 第57-59页 |
| 2.4.4 特异性噬菌体单克隆的鉴定 | 第59-60页 |
| 2.4.5 单链抗体的氨基酸序列分析 | 第60-61页 |
| 2.5 讨论 | 第61-62页 |
| 2.6 本章小结 | 第62-64页 |
| 第三章 甘胆酸特异单链抗体的原核表达及应用研究 | 第64-85页 |
| 3.1 引言 | 第64页 |
| 3.2 实验材料 | 第64-66页 |
| 3.2.1 仪器及耗材 | 第64-65页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第65-66页 |
| 3.2.3 菌株和载体 | 第66页 |
| 3.2.4 主要缓冲液及培养基 | 第66页 |
| 3.3 实验方法 | 第66-73页 |
| 3.3.1 化学转化感受态细胞E.coli TOP10F'的制备 | 第66-67页 |
| 3.3.2 质粒pComb3x-scFv的化学转化 | 第67页 |
| 3.3.3 质粒pComb3x-scFv的提取 | 第67-68页 |
| 3.3.4 单链抗体蛋白的原核表达 | 第68-69页 |
| 3.3.5 单链抗体蛋白的纯化 | 第69页 |
| 3.3.6 SDS-PAGE分析单链抗体蛋白 | 第69页 |
| 3.3.7 单链抗体蛋白效价的测定 | 第69-70页 |
| 3.3.8 建立基于单链抗体检测尿液中GCA的ELISA | 第70-73页 |
| 3.4 实验结果 | 第73-83页 |
| 3.4.1 单链抗体蛋白的诱导表达、纯化及鉴定 | 第73页 |
| 3.4.2 基于单链抗体蛋白ELISA检测条件的优化 | 第73-80页 |
| 3.4.3 加标回收率 | 第80-83页 |
| 3.5 讨论 | 第83-84页 |
| 3.6 本章小结 | 第84-85页 |
| 第四章 基于生物素化单链抗体的应用研究 | 第85-112页 |
| 4.1 引言 | 第85-86页 |
| 4.2 实验材料 | 第86-89页 |
| 4.2.1 主要仪器 | 第86-87页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第87-88页 |
| 4.2.3 主要耗材 | 第88页 |
| 4.2.4 载体和菌株 | 第88-89页 |
| 4.2.5 引物 | 第89页 |
| 4.2.6 主要缓冲液及培养基 | 第89页 |
| 4.3 实验方法 | 第89-99页 |
| 4.3.1 化学生物素法标记单链抗体 | 第89-90页 |
| 4.3.2 酶催化生物素法标记单链抗体 | 第90-97页 |
| 4.3.3 建立基于生物素化单链抗体检测尿液中GCA的BA-ELISA | 第97-99页 |
| 4.4 实验结果 | 第99-110页 |
| 4.4.1 基于化学生物素法标记单链抗体的BA-ELISA | 第99-101页 |
| 4.4.2 生物素化融合蛋白表达载体pINQ-BtH6-G11的构建 | 第101页 |
| 4.4.3 建立基于生物素化单链抗体检测尿液中GCA的BA-ELISA | 第101-110页 |
| 4.5 讨论 | 第110-111页 |
| 4.6 本章小结 | 第111-112页 |
| 第五章 结论与展望 | 第112-114页 |
| 5.1 结论 | 第112-113页 |
| 5.1.1 噬菌体展示单链抗体文库的构建、淘选及鉴定 | 第112页 |
| 5.1.2 单链抗体的原核表达及应用研究 | 第112页 |
| 5.1.3 基于生物素化单链抗体的应用研究 | 第112-113页 |
| 5.2 展望 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-128页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第128-131页 |
| 致谢 | 第131页 |
