| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1.1 猪圆环病毒概况 | 第12-15页 |
| 1.1.1 猪圆环病毒历史背景 | 第12页 |
| 1.1.2 猪圆环病毒2型的病原学特性 | 第12-13页 |
| 1.1.3 猪圆环病毒2型的基因组研究 | 第13-14页 |
| 1.1.4 PCV2病毒样颗粒研究进展 | 第14-15页 |
| 1.1.5 PCV2的致病性和社会危害 | 第15页 |
| 1.2 PCV2靶细胞及其受体的研究现状 | 第15-18页 |
| 1.2.1 病毒入侵靶细胞机制 | 第15-16页 |
| 1.2.2 PCV2的靶细胞研究 | 第16页 |
| 1.2.3 PCV2配体表位与靶细胞受体 | 第16-18页 |
| 1.3 核仁素 | 第18-19页 |
| 1.3.1 核仁素简介 | 第18页 |
| 1.3.2 核仁素的功能研究 | 第18-19页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第19-21页 |
| 第二章 免疫共沉淀-质谱分析细胞内与PCV2VLPs互作的蛋白 | 第21-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 细胞、菌株、质粒和血清抗体 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.4 主要溶液配制 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-29页 |
| 2.2.1 重组PCV2-DNLS-Cap蛋白的表达及纯化 | 第22-25页 |
| 2.2.2 PCV2-DNLS-VLP的组装及细胞入侵分析 | 第25-26页 |
| 2.2.3 兔血清纯化 | 第26-27页 |
| 2.2.4 免疫共沉淀实验 | 第27-29页 |
| 2.3 实验结果 | 第29-34页 |
| 2.3.1 蛋白纯化及鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3.2 透射电镜下的PCV2-DNLS-VLPs | 第30页 |
| 2.3.3 PCV2-DNLS-VLPs模拟病毒入侵宿主细胞 | 第30-31页 |
| 2.3.4 免疫共沉淀 | 第31-32页 |
| 2.3.5 质谱结果 | 第32-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 过表达核仁素对PCV2增殖的影响 | 第36-50页 |
| 3.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 3.1.1 病毒、细胞、菌株和载体 | 第36页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第36-37页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-44页 |
| 3.2.1 重组质粒的构建及鉴定 | 第37-42页 |
| 3.2.2 细胞内核仁素(NCL)对PCV2复制的影响 | 第42-44页 |
| 3.3 实验结果 | 第44-48页 |
| 3.3.1 NCL全基因序列的扩增、克隆及测序 | 第44页 |
| 3.3.2 重组质粒的酶切验证 | 第44-45页 |
| 3.3.3 重组质粒过表达效率鉴定 | 第45-46页 |
| 3.3.4 PCV2的标准曲线的建立 | 第46-47页 |
| 3.3.5 Real-time PCR检测病毒增殖量的变化 | 第47-48页 |
| 3.4 讨论 | 第48-50页 |
| 第四章 RNA干扰核仁素对PCV2增殖的影响 | 第50-57页 |
| 4.1 实验材料 | 第50-51页 |
| 4.1.1 病毒、细胞和siRNA | 第50页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第50-51页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第51页 |
| 4.2 实验方法 | 第51-52页 |
| 4.2.1 siRNA的转染条件优化 | 第51-52页 |
| 4.2.2 筛选有效的siRNA | 第52页 |
| 4.2.3 检测干扰表达NCL的细胞系中PCV2的mRNA水平 | 第52页 |
| 4.2.4 统计学处理 | 第52页 |
| 4.3 实验结果 | 第52-54页 |
| 4.3.1 siRNA与Lipofectamine2000的最佳转染比例探索 | 第52-53页 |
| 4.3.2 最佳干扰效果siNCL的筛选 | 第53-54页 |
| 4.3.3 Real-timePCR检测病毒增殖量的变化 | 第54页 |
| 4.4 讨论 | 第54-57页 |
| 第五章 总结 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 致谢 | 第63-65页 |
| 作者简历 | 第65页 |
