| 内容提要 | 第1-5页 |
| 英文缩略词表 | 第5-9页 |
| 前言 | 第9-17页 |
| 一、血管生成与肿瘤 | 第9-13页 |
| 1 血管生成的过程 | 第9-10页 |
| 2 血管形成过程中的调节因子 | 第10页 |
| 3 肿瘤与血管生成 | 第10-11页 |
| 4 肿瘤血管生成抑制剂（Tumor Angiogenesis Inhibitor ,TAI）的研究 | 第11页 |
| 5 血管生成抑制剂的筛选方法 | 第11-12页 |
| 6 血管生成抑制剂存在的问题 | 第12-13页 |
| 二、PROEMAPⅡ/P43 的研究背景 | 第13-16页 |
| 1 proEMAPⅡ/p43 的简介 | 第13页 |
| 2 p43 蛋白的分布和基本功能 | 第13-14页 |
| 3 p43 蛋白的生物学功能 | 第14-15页 |
| 4 p43 蛋白的应用前景 | 第15-16页 |
| 三、本论文的实验设计 | 第16-17页 |
| 第1章 重组人PROEMAPⅡ蛋白体外抑制新生血管生成活性方法的建立 | 第17-30页 |
| 1 实验材料 | 第17-18页 |
| ·蛋白与细胞株 | 第17页 |
| ·受精鸡蛋 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17页 |
| ·主要细胞培养基和溶液的配制 | 第17-18页 |
| ·主要仪器 | 第18页 |
| 2 实验方法 | 第18-22页 |
| ·细胞培养 | 第18页 |
| ·细胞增殖实验 | 第18-19页 |
| ·细胞周期分析 | 第19-20页 |
| ·鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）实验 | 第20页 |
| ·HMEC-1 管腔形成实验 | 第20-21页 |
| ·HMEC-1 细胞迁移实验 | 第21-22页 |
| 3 结果与讨论 | 第22-28页 |
| ·p43 蛋白对细胞增殖的影响 | 第22页 |
| ·HMEC-1 细胞周期分析 | 第22-23页 |
| ·鸡胚绒毛尿囊膜实验分析 | 第23-25页 |
| ·p43 蛋白对HMEC-1 细胞管腔形成的抑制作用 | 第25-26页 |
| ·p43 蛋白对HMEC-1 细胞迁移的抑制作用 | 第26-27页 |
| ·讨论 | 第27-28页 |
| 4 小结 | 第28-30页 |
| 第2章 PRO EMAPⅡ活性缺失突变体的筛选 | 第30-53页 |
| 1 实验材料 | 第30-34页 |
| ·菌株和质粒 | 第30页 |
| ·细胞 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30-31页 |
| ·主要培养基和溶液的配制 | 第31-33页 |
| ·主要仪器 | 第33-34页 |
| 2 实验方法 | 第34-40页 |
| ·p43 蛋白系列缺失体的设计 | 第34页 |
| ·引物设计合成 | 第34页 |
| ·p43 系列缺失体目的片段的PCR 扩增 | 第34-36页 |
| ·p43 系列缺失体原核表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·p43 系列缺失体蛋白的表达和纯化 | 第37-39页 |
| ·p43 系列缺失体蛋白的活性测定 | 第39-40页 |
| ·p43-（3-10）、p43-（5-10）缺失体的构建与表达 | 第40页 |
| 3 结果与讨论 | 第40-52页 |
| ·p43 蛋白的结构预测结果 | 第40页 |
| ·p43 系列缺失体的构建 | 第40-43页 |
| ·目的片段的PCR 扩增 | 第43页 |
| ·EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定结果 | 第43-44页 |
| ·p43 系列缺失体蛋白的表达 | 第44-45页 |
| ·p43 系列缺失体蛋白的纯化及浓度测定 | 第45-47页 |
| ·p43 缺失体对HMEC-1 管腔形成的作用 | 第47-49页 |
| ·p43 缺失体对HMEC-1 细胞迁移的作用 | 第49页 |
| ·p43-（3-10）、p43-（5-10）缺失体的构建与表达结果 | 第49-51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| 4 小结 | 第52-53页 |
| 第3章 PRO EMAPⅡ单克隆抗体和多克隆抗体的制备 | 第53-61页 |
| 1 实验材料 | 第53-54页 |
| ·蛋白 | 第53页 |
| ·细胞与实验动物 | 第53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·主要培养基和溶液的配制 | 第53-54页 |
| ·主要仪器 | 第54页 |
| 2 实验方法 | 第54-58页 |
| ·p43 多克隆抗体的制备和效价测定 | 第54-55页 |
| ·p43 单克隆抗体（Anti-p43 Ab）的制备[52] | 第55-57页 |
| ·p43 单克隆抗体效价和特异性的测定 | 第57-58页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第58-60页 |
| ·p43 多克隆抗体效价的测定 | 第58页 |
| ·p43 单克隆抗体效价的测定 | 第58-59页 |
| ·Western Blot 检测p43 单克隆抗体的特异性 | 第59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| 4 小结 | 第60-61页 |
| 第4章 基因芯片研究PRO EMAPⅡ对HMEC-1 细胞基因表达的调控 | 第61-77页 |
| 1 实验材料 | 第61-62页 |
| ·细胞株 | 第61页 |
| ·基因芯片 | 第61页 |
| ·主要试剂 | 第61-62页 |
| ·主要培养基和溶液的配制 | 第62页 |
| ·主要仪器 | 第62页 |
| 2 实验方法 | 第62-67页 |
| ·基因芯片筛选差异基因 | 第62-63页 |
| ·Real-time PCR 法验证基因芯片结果 | 第63-67页 |
| ·Real-time PCR 法确定p43 蛋白发挥作用最佳时间和最佳浓度 | 第67页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第67-76页 |
| ·p43 作用于HMEC-1 细胞的基因芯片分析 | 第67-72页 |
| ·基因芯片结果的验证 | 第72-73页 |
| ·确定p43 蛋白发挥作用的最佳时间和最佳浓度 | 第73-75页 |
| ·讨论 | 第75-76页 |
| 4 小结 | 第76-77页 |
| 结论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-83页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 摘要 | 第85-87页 |
| ABSTRACT | 第87-88页 |
