| 缩略语表 | 第6-9页 |
| 中文摘要 | 第9-13页 |
| ABSTRACT | 第13-17页 |
| 前言 | 第18-19页 |
| 文献回顾 | 第19-31页 |
| 第一部分 Lapatinib耐药HER2阳性细胞株的筛选及耐药性分析 | 第31-41页 |
| 1 材料 | 第31-33页 |
| 1.1 细胞系 | 第31-32页 |
| 1.2 主要试剂与材料 | 第32页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第32-33页 |
| 1.4 常用缓冲液 | 第33页 |
| 2 方法 | 第33-38页 |
| 2.1 细胞培养、传代、冻存和复苏 | 第33-35页 |
| 2.2 BT-474和AU-565耐药细胞的构建及培养 | 第35页 |
| 2.3 MTT法分析细胞对拉帕替尼的敏感性 | 第35-36页 |
| 2.4 Ed U分析 | 第36-37页 |
| 2.5 软琼脂克隆形成能力分析 | 第37页 |
| 2.6 统计学分析 | 第37-38页 |
| 3 结果 | 第38-40页 |
| 3.1 MTT法分析细胞对Lapatinib的耐药性 | 第38页 |
| 3.2 Ed U法分析亲本细胞和耐药细胞在Lapatinib处理时细胞增殖能力差异 | 第38-39页 |
| 3.3 软琼脂克隆法分析亲本细胞和耐药细胞在Lapatinib处理时克隆形成能力的差异 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-41页 |
| 第二部分 细胞自噬促进HER2阳性细胞株获得Lapatinib耐药性的功能评价 | 第41-53页 |
| 1 材料 | 第41-43页 |
| 1.1 主要试剂与材料 | 第41-42页 |
| 1.2 主要仪器设备 | 第42-43页 |
| 2 方法 | 第43-46页 |
| 2.1 细胞培养、传代、冻存和复苏 | 第43页 |
| 2.2 透射电镜检测细胞自噬体 | 第43页 |
| 2.3 GFP-LC3转染及细胞定位分析 | 第43-44页 |
| 2.4 MTT检测耐药细胞的药物敏感性 | 第44页 |
| 2.5 Ed U分析检测耐药细胞的药物敏感性 | 第44-45页 |
| 2.6 细胞平板克隆形成能力分析 | 第45页 |
| 2.7 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第45-46页 |
| 3 结果 | 第46-51页 |
| 3.1 透射电镜观察到自噬体形成 | 第46页 |
| 3.2 激光共聚焦显微镜观察GFP-LC3转染的细胞自噬体聚集状态 | 第46-47页 |
| 3.3 MTT分析耐药细胞的药物敏感性 | 第47-48页 |
| 3.4 Ed U分析耐药细胞的药物敏感性 | 第48-49页 |
| 3.5 平板克隆检测耐药细胞克隆生长情况明显改变 | 第49-50页 |
| 3.6 流式细胞检测可见耐药细胞凋亡状态改变 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| 第三部分 细胞自噬在Lapatinib耐药细胞中活化的分子机制研究 | 第53-60页 |
| 1 材料 | 第53-55页 |
| 1.1 主要试剂与材料 | 第53-54页 |
| 1.2 常用缓冲液 | 第54页 |
| 1.3 常用仪器 | 第54-55页 |
| 2 方法 | 第55-56页 |
| 2.1 细胞培养 | 第55页 |
| 2.2 细胞样品收集、蛋白定量和Western Blotting分析 | 第55-56页 |
| 2.3 MTT检测AMPK抑制剂对BT-474~(LapR)耐药细胞药物敏感性的影响 | 第56页 |
| 3 结果 | 第56-58页 |
| 3.1 AMPK在BT-474~(LapR)耐药细胞中处于活化状态 | 第56-57页 |
| 3.2 抑制AMPK信号通路可以阻断细胞自噬过程 | 第57-58页 |
| 3.3 抑制AMPK信号通路增加BT-474~(LapR)细胞对Lapatinib的治疗敏感性 | 第58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 第四部分 Lapatinib耐药细胞的ROS水平分析及BR干预研究 | 第60-67页 |
| 1 材料 | 第60-61页 |
| 1.1 主要试剂与材料 | 第60页 |
| 1.2 常用缓冲液 | 第60-61页 |
| 1.3 常用仪器 | 第61页 |
| 2 方法 | 第61-63页 |
| 2.1 细胞ROS水平检测（DCFH-DA标记法） | 第61-62页 |
| 2.2 细胞增殖状态检测 | 第62页 |
| 2.3 流式细胞仪检测细胞凋亡状态 | 第62-63页 |
| 3 结果 | 第63-66页 |
| 3.1 BR可以协同Lapatinib抑制BT-474~(LapR)的增殖 | 第63页 |
| 3.2 BT-474~(LapR)的ROS水平降低 | 第63-64页 |
| 3.3 BR可以上调BT-474~(LapR)的ROS水平 | 第64-65页 |
| 3.4 BR抑制BT-474~(LapR)的DNA复制能力依赖于ROS水平的增加（Ed U分析） | 第65页 |
| 3.5 BR协同Lapatinib促进BT-474~(LapR)的凋亡依赖于ROS水平的增加（流式细胞术分析） | 第65-66页 |
| 4 讨论 | 第66-67页 |
| 小结 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 个人简历和研究成果 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
