| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第11-16页 |
| 1.1 研究背景 | 第11页 |
| 1.2 Skp2与肿瘤 | 第11-16页 |
| 1.2.1 Skp2结构与功能 | 第11-14页 |
| 1.2.2 小分子多肽 | 第14-15页 |
| 1.2.3 Skp2的多种底物 | 第15-16页 |
| 第2章 主要方法和设计流程 | 第16-35页 |
| 2.1 引言 | 第16页 |
| 2.2 主要方法 | 第16-31页 |
| 2.2.1 酵母双杂交 | 第16-17页 |
| 2.2.2 分子克隆 | 第17-18页 |
| 2.2.3 Gel Extraction（OMEGA试剂盒） | 第18-19页 |
| 2.2.4 转化 | 第19-20页 |
| 2.2.5 小分子多肽基因合成 | 第20-21页 |
| 2.2.6 反转录（TAKARA试剂盒） | 第21页 |
| 2.2.7 Q-PCR | 第21-22页 |
| 2.2.8 琼脂糖凝胶电泳 | 第22-23页 |
| 2.2.9 凝胶成像系统分析 | 第23页 |
| 2.2.10 Plasmid Isolation（OMEGA小提试剂盒） | 第23页 |
| 2.2.11 Plasmid Isolation（TIANGEN大提试剂盒） | 第23-24页 |
| 2.2.12 RNA提取（Trizol提取法） | 第24-25页 |
| 2.2.13 Superfectin Transfection （普飞生物） | 第25页 |
| 2.2.14 磷酸钙转染 | 第25-26页 |
| 2.2.15 PEI Transfection | 第26页 |
| 2.2.16 Western Blot | 第26-28页 |
| 2.2.17 超声破碎 | 第28-29页 |
| 2.2.18 NI-柱纯化 | 第29页 |
| 2.2.19透析 | 第29页 |
| 2.2.20 BCA蛋白定量 | 第29-30页 |
| 2.2.21 PI染色细胞周期 | 第30页 |
| 2.2.22 MTT细胞增殖实验 | 第30-31页 |
| 2.2.23 GST-pull down实验 | 第31页 |
| 2.3 试剂及设备 | 第31-34页 |
| 2.3.1 实验试剂 | 第31-33页 |
| 2.3.2 实验仪器设备 | 第33-34页 |
| 2.4 设计流程 | 第34-35页 |
| 第3章 实验结果 | 第35-55页 |
| 3.1 引言 | 第35页 |
| 3.2 酵母双杂交 | 第35-36页 |
| 3.3 小分子多肽构建及纯化 | 第36-40页 |
| 3.3.1 多肽适配体及支架蛋白的原核表达载体的构建 | 第36-39页 |
| 3.3.2 多肽适配体的IPTG诱导表达及纯化 | 第39-40页 |
| 3.4 体外相互作用机制研究 | 第40-42页 |
| 3.4.1 GST标签及标签蛋白Skp2的构建及诱导表达 | 第40-41页 |
| 3.4.2 GST-pull down实验体外验证多肽和Skp2之间相互作用 | 第41-42页 |
| 3.5 肿瘤细胞系的筛选 | 第42-46页 |
| 3.5.1 肺癌细胞系Skp2和底物的mRNA和蛋白水平 | 第42-44页 |
| 3.5.2 胃癌、乳腺癌细胞系Skp2和底物的mRNA和蛋白水平 | 第44-45页 |
| 3.5.3 神经胶质瘤细胞系Skp2和底物的mRNA和蛋白水平 | 第45-46页 |
| 3.5.4 细胞系的确定 | 第46页 |
| 3.6 功能多肽的筛选 | 第46-51页 |
| 3.6.1 纯化蛋白浓度的测定 | 第46-47页 |
| 3.6.2 多肽适配体给药 | 第47页 |
| 3.6.3 A549细胞转染方法的确定 | 第47-48页 |
| 3.6.4 A549细胞系中转染多肽后Skp2底物蛋白变化 | 第48-49页 |
| 3.6.5 HeLa转染方法筛选 | 第49-50页 |
| 3.6.6 HeLa细胞系中梯度转染多肽后Skp2底物蛋白变化 | 第50-51页 |
| 3.7 功能验证 | 第51-54页 |
| 3.7.1 多肽适配体 6-1、8-1 和 23-5 对细胞周期的影响 | 第51-53页 |
| 3.7.2 多肽适配体 6-1、8-1 和 23-5 影响细胞增殖实验 | 第53-54页 |
| 3.8 结论 | 第54-55页 |
| 第4章 讨论与展望 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-61页 |
| 综述 | 第61-70页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
