| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-32页 |
| 1.1 苹果产业的重要性 | 第13-14页 |
| 1.2 危害苹果的病毒病 | 第14-15页 |
| 1.3 危害苹果的三种潜隐性病毒 | 第15-26页 |
| 1.3.1 潜隐性病毒的生物学特性 | 第15-18页 |
| 1.3.2 潜隐性病毒的分子特性 | 第18-24页 |
| 1.3.3 潜隐性病毒的检测方法 | 第24-26页 |
| 1.3.4 潜隐性病毒的防治 | 第26页 |
| 1.4 植物病毒的分子变异 | 第26-27页 |
| 1.4.1 突变 | 第26-27页 |
| 1.4.2 重组 | 第27页 |
| 1.4.3 重排 | 第27页 |
| 1.5 植物病毒种群进化的因素 | 第27-29页 |
| 1.5.1 基因漂变 | 第28页 |
| 1.5.2 选择 | 第28-29页 |
| 1.6 分子变异分析常用的方法 | 第29-30页 |
| 1.6.1 序列的两两一致性分析 | 第29页 |
| 1.6.2 多重比对分析 | 第29页 |
| 1.6.3 系统发育分析 | 第29页 |
| 1.6.4 重组检测分析 | 第29-30页 |
| 1.6.5 选择压力分析 | 第30页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第30-32页 |
| 第二章 陕西省三种苹果潜隐性病毒的发生情况调查研究 | 第32-49页 |
| 前言 | 第32页 |
| 2.1 材料和方法 | 第32-41页 |
| 2.1.1 苹果叶片样品的采集 | 第32页 |
| 2.1.2 血清学检测 | 第32-34页 |
| 2.1.3 苹果叶片总 RNA 的提取 | 第34-37页 |
| 2.1.4 检测引物的选择 | 第37-38页 |
| 2.1.5 反转录扩增 | 第38页 |
| 2.1.6 三种潜隐性病毒的多重 PCR 扩增体系 | 第38页 |
| 2.1.7 PCR 产物的凝胶电泳检测 | 第38-39页 |
| 2.1.8 回收 | 第39页 |
| 2.1.9 感受态细胞的制备 | 第39页 |
| 2.1.10 连接 | 第39-40页 |
| 2.1.11 转化 | 第40页 |
| 2.1.12 菌液的 PCR 检测 | 第40-41页 |
| 2.2 结果和分析 | 第41-46页 |
| 2.2.1 苹果叶片样品的采集情况统计 | 第41页 |
| 2.2.2 植物叶片总 RNA 的提取 | 第41-43页 |
| 2.2.3 三种苹果潜隐性病毒在陕西苹果园的发生情况 | 第43-46页 |
| 2.3 讨论 | 第46-48页 |
| 2.3.1 苹果叶片总 RNA 提取方法 | 第46页 |
| 2.3.2 DAS–ELISA 与 RT–PCR 检测结果的比较 | 第46-47页 |
| 2.3.3 三种苹果潜隐性病毒在陕西的发生情况 | 第47-48页 |
| 2.4 小结 | 第48-49页 |
| 第三章 苹果褪绿叶斑病毒陕西苹果分离物的分子变异分析 | 第49-67页 |
| 前言 | 第49页 |
| 3.1 材料和方法 | 第49-52页 |
| 3.1.1 苹果褪绿叶斑病毒 (ACLSV)苹果叶片样品来源 | 第49-50页 |
| 3.1.2 试验用到的试剂 | 第50页 |
| 3.1.3 扩增苹果褪绿叶斑病毒外壳蛋白基因用到的引物 | 第50页 |
| 3.1.4 SDS 改良法提取苹果叶片总 RNA | 第50页 |
| 3.1.5 反转录 | 第50页 |
| 3.1.6 聚合酶链式反应扩增 ACLSV 的外壳蛋白(CP)基因 | 第50-51页 |
| 3.1.7 PCR 产物的回收、连接和转化 | 第51页 |
| 3.1.8 阳性克隆的筛选 | 第51页 |
| 3.1.9 测序 | 第51页 |
| 3.1.10 序列分析 | 第51-52页 |
| 3.2 结果和分析 | 第52-64页 |
| 3.2.1 用于分析的序列的获得 | 第52-58页 |
| 3.2.2 序列一致性分析 | 第58-59页 |
| 3.2.3 系统发育分析 | 第59-60页 |
| 3.2.4 多重比对分析 | 第60页 |
| 3.2.5 重组检测分析 | 第60页 |
| 3.2.6 种群遗传多样性分析 | 第60-64页 |
| 3.3 讨论 | 第64-66页 |
| 3.4 小结 | 第66-67页 |
| 第四章 苹果茎痘病毒陕西苹果分离物的基因组序列测定与分子变异分析 | 第67-83页 |
| 前言 | 第67-68页 |
| 4.1 材料和方法 | 第68-73页 |
| 4.1.1 毒源 | 第68页 |
| 4.1.2 苹果叶片总 RNA 提取 | 第68页 |
| 4.1.3 用于扩增 ASPV 基因组引物的设计与合成 | 第68页 |
| 4.1.4 cDNA 的合成 | 第68-70页 |
| 4.1.5 5’和 3’Race 扩增两端 | 第70-72页 |
| 4.1.6 PCR 扩增 | 第72页 |
| 4.1.7 PCR 产物的琼脂糖凝胶电泳、产物回收、连接和转化 | 第72页 |
| 4.1.8 阳性克隆的筛选、测序 | 第72页 |
| 4.1.9 序列分析 | 第72-73页 |
| 4.2 结果 | 第73-81页 |
| 4.2.1 用于分析的序列的获得 | 第73-75页 |
| 4.2.2 序列一致性分析 | 第75-76页 |
| 4.2.3 系统发育分析 | 第76-78页 |
| 4.2.4 氨基酸多重比对分析 | 第78页 |
| 4.2.5 选择压力分析 | 第78-80页 |
| 4.2.6 重组分析 | 第80-81页 |
| 4.3 讨论 | 第81-82页 |
| 4.4 小结 | 第82-83页 |
| 第五章 苹果茎沟病毒陕西苹果分离物的基因组序列测定与分子变异分析 | 第83-102页 |
| 前言 | 第83-84页 |
| 5.1 材料和方法 | 第84-87页 |
| 5.1.1 毒源获得 | 第84页 |
| 5.1.2 苹果叶片总 RNA 提取 | 第84页 |
| 5.1.3 用于扩增 ASGV 基因组引物的设计与合成 | 第84页 |
| 5.1.4 cNDA 合成 | 第84-86页 |
| 5.1.5 ASGV5’和 3’Race 扩增两端 | 第86页 |
| 5.1.6 扩增目标条带 | 第86页 |
| 5.1.7 PCR 产物的琼脂糖凝胶电泳、电泳产物的回收、连接和转化 | 第86页 |
| 5.1.8 阳性克隆的筛选、测序 | 第86页 |
| 5.1.9 序列分析 | 第86-87页 |
| 5.2 结果 | 第87-100页 |
| 5.2.1 用于分析的序列的获得 | 第87-91页 |
| 5.2.2 序列一致性分析 | 第91页 |
| 5.2.3 系统发育分析 | 第91-92页 |
| 5.2.4 多重比对分析 | 第92页 |
| 5.2.5 选择压力分析 | 第92-98页 |
| 5.2.6 重组分析 | 第98-100页 |
| 5.3 讨论 | 第100-101页 |
| 5.4 小结 | 第101-102页 |
| 第六章 结论和创新点 | 第102-104页 |
| 6.1 结论 | 第102-103页 |
| 6.1.1 ACLSV、ASPV 和 ASGV 在陕西苹果产区均有发生 | 第102页 |
| 6.1.2 ACLSV 陕西苹果分离物 CP 基因分子变异分析 | 第102页 |
| 6.1.3 ASPV 陕西苹果分离物的基因组序列测定及分子变异分析 | 第102页 |
| 6.1.4 ASGV 陕西苹果分离物的基因组序列测定及分子变异分析 | 第102-103页 |
| 6.2 创新点 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-117页 |
| 附表一 | 第117-123页 |
| 附表二 | 第123-130页 |
| 附表三 | 第130-137页 |
| 附录 | 第137-143页 |
| 致谢 | 第143-144页 |
| 作者简介 | 第144页 |
