| 摘要 | 第2-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 符号说明 | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1.1 RNAi的概述 | 第11-12页 |
| 1.1.1 RNAi的发现 | 第11页 |
| 1.1.2 RNAi的分类 | 第11-12页 |
| 1.1.3 RNAi的原理 | 第12页 |
| 1.2 RNAi技术在农业防治中的现状 | 第12-14页 |
| 1.2.1 RNAi在防治害虫中的有效案例 | 第12-13页 |
| 1.2.2 RNAi在防治害虫中的差异性 | 第13-14页 |
| 1.3 苹果蠹蛾的研究概况 | 第14-16页 |
| 1.3.1 苹果蠹蛾的基本生物学特征和危害 | 第14-16页 |
| 1.3.2 当前防治苹果蠹蛾所采取的手段 | 第16页 |
| 1.3.3 RNAi方法防治苹果蠹蛾新手段的提出 | 第16页 |
| 1.4 目的基因的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.4.1 核酸降解酶系基因的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.4.2 细胞凋亡抑制基因的研究进展 | 第17页 |
| 1.5 选题的目的和意义 | 第17-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-33页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第19页 |
| 2.1.2 主要实验试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 主要试剂配方 | 第19-20页 |
| 2.2 仪器与设备 | 第20-21页 |
| 2.3 实验技术路线 | 第21页 |
| 2.4 实验方法 | 第21-33页 |
| 2.4.1 引物设计 | 第21-23页 |
| 2.4.2 苹果蠹蛾幼虫总RNA提取 | 第23页 |
| 2.4.3 模板的制备 | 第23-24页 |
| 2.4.4 目的基因的扩增 | 第24页 |
| 2.4.5 PCR产物纯化 | 第24-25页 |
| 2.4.6 T载体连接和转化 | 第25-26页 |
| 2.4.7 菌落PCR鉴定和测序 | 第26页 |
| 2.4.8 质粒的提取 | 第26-27页 |
| 2.4.9 生物信息学分析 | 第27页 |
| 2.4.10 实时定量PCR检测 | 第27页 |
| 2.4.11 幼虫样品的选取 | 第27-28页 |
| 2.4.12 组织液降解双链RNA | 第28页 |
| 2.4.13 原核表达载体的构建 | 第28页 |
| 2.4.14 目的基因的诱导表达 | 第28-29页 |
| 2.4.15 免疫印迹实验 | 第29-30页 |
| 2.4.16 dsRNA的合成 | 第30-32页 |
| 2.4.17 siRNA的合成 | 第32页 |
| 2.4.18 外源RNA导入苹果蠹蛾 | 第32-33页 |
| 第三章 结果与分析 | 第33-44页 |
| 3.1 目的基因的基本信息 | 第33-36页 |
| 3.1.1 RNase系基因的克隆 | 第33-34页 |
| 3.1.2 IAP基因的克隆 | 第34页 |
| 3.1.3 RNase蛋白结构比对 | 第34-35页 |
| 3.1.4 RNase信号肽的预测 | 第35-36页 |
| 3.1.5 RNase发育树的构建 | 第36页 |
| 3.2 目的基因的时空表达水平 | 第36-39页 |
| 3.2.1 定量引物的扩增效率 | 第36-37页 |
| 3.2.2 目的基因在幼虫阶段不同时期时的表达水平 | 第37-38页 |
| 3.2.3 目的基因在不同组织时的表达水平 | 第38-39页 |
| 3.3 RNase蛋白降解双链的检测 | 第39-41页 |
| 3.3.1 苹果蠹蛾不同组织液对dsRNA的降解程度 | 第39页 |
| 3.3.2 构建原核表达载体 | 第39-40页 |
| 3.3.3 免疫印迹法检测目的蛋白 | 第40页 |
| 3.3.4 RNase2蛋白降解双链的检测 | 第40-41页 |
| 3.4 RNAi干扰效率的检测 | 第41-44页 |
| 3.4.1 合成双链RNA | 第41页 |
| 3.4.2 检测不同方式注射dsIAP后的表达情况 | 第41-42页 |
| 3.4.3 注射siRNA后目的基因表达水平检测 | 第42页 |
| 3.4.4 检测注射siRNA后饲喂dsIAP的表达水平 | 第42-44页 |
| 第四章 讨论 | 第44-47页 |
| 第五章 总结 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 附录 | 第54-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 攻读学位期间取得的学术成果目录 | 第60-61页 |
