| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 缩略词 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-23页 |
| 1.1 氨肽酶概述 | 第11-16页 |
| 1.1.1 氨肽酶的性质 | 第11页 |
| 1.1.2 氨肽酶的来源 | 第11-12页 |
| 1.1.3 氨肽酶的分类 | 第12页 |
| 1.1.4 亮氨酸氨肽酶 | 第12-13页 |
| 1.1.5 亮氨酸氨肽酶的应用 | 第13-14页 |
| 1.1.6 国内外研究概况 | 第14-16页 |
| 1.2 蛋白水解概述 | 第16-18页 |
| 1.2.1 蛋白水解 | 第16页 |
| 1.2.2 蛋白酶水解技术 | 第16-18页 |
| 1.3 大豆蛋白水解研究概述 | 第18-20页 |
| 1.4 课题意义及研究内容 | 第20-23页 |
| 1.4.1 课题意义 | 第20-21页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第21-23页 |
| 第二章 酱油曲霉亮氨酸氨肽酶基因克隆 | 第23-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第23页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第23页 |
| 2.1.3 酶与主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 克隆酱油曲霉亮氨酸氨肽酶基因的引物 | 第23-24页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第24页 |
| 2.1.6 培养基 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-27页 |
| 2.2.1 A.sojae菌株培养 | 第24页 |
| 2.2.2 A.sojae菌丝体总RNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.3 RT-PCR克隆slap1 全长编码序列 | 第25-26页 |
| 2.2.4 TA克隆与重组质粒的筛选与鉴定 | 第26页 |
| 2.2.5 菌落PCR筛选阳性克隆 | 第26-27页 |
| 2.3 结果与分析 | 第27-29页 |
| 2.3.1 酱油曲霉菌丝体总RNA提取结果 | 第27页 |
| 2.3.2 亮氨酸氨肽酶slap1 基因的克隆结果 | 第27-28页 |
| 2.3.3 slap1 TA克隆阳性筛选结果 | 第28页 |
| 2.3.4 slap1 阳性克隆测序结果 | 第28-29页 |
| 2.4 本章小结 | 第29-30页 |
| 第三章 亮氨酸氨肽酶基因在毕赤酵母中表达及其酶学性质研究 | 第30-47页 |
| 3.1 实验材料 | 第30-32页 |
| 3.1.1 供试菌株与质粒 | 第30页 |
| 3.1.2 酶与主要试剂 | 第30-31页 |
| 3.1.3 酱油曲霉亮氨酸氨肽酶基因在毕赤酵母中的表达引物 | 第31页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第31页 |
| 3.1.5 培养基及储液 | 第31-32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-38页 |
| 3.2.1 slap1 基因转化毕赤酵母KM71 | 第32-33页 |
| 3.2.2 阳性毕赤酵母转化子的筛选与鉴定 | 第33-34页 |
| 3.2.3 重组毕赤酵母工程菌株诱导表达亮氨酸氨肽酶rSLAP1 | 第34页 |
| 3.2.4 重组亮氨酸氨肽酶rSLAP1 酶活测定 | 第34-35页 |
| 3.2.5 重组亮氨酸氨肽酶rSLAP1 的SDS-PAGE电泳鉴定 | 第35-36页 |
| 3.2.6 重组亮氨酸氨肽酶rSLAP1 的纯化及其蛋白浓度测定 | 第36-37页 |
| 3.2.7 重组亮氨酸氨肽酶rSLAP1 酶学性质测定 | 第37-38页 |
| 3.3 结果与分析 | 第38-45页 |
| 3.3.1 slap1 与毕赤酵母中表达载体pPI9K构建结果 | 第38-39页 |
| 3.3.2 阳性重组毕赤酵母菌株的筛选和鉴定 | 第39-40页 |
| 3.3.3 重组菌株诱导表达rSLAP1 | 第40页 |
| 3.3.4 亮氨酸氨肽酶rSLAP1 纯化的结果 | 第40-42页 |
| 3.3.5 亮氨酸氨肽酶rSLAP1 酶学性质测定结果 | 第42-45页 |
| 3.4 本章小结 | 第45-47页 |
| 第四章 使用rSLAP1 对苦味蛋白水解物进行脱苦试验 | 第47-51页 |
| 4.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 4.1.1 主要蛋白底物 | 第47页 |
| 4.1.2 酶与主要试剂 | 第47页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第47-48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-49页 |
| 4.2.1 蛋白样品溶液制备 | 第48页 |
| 4.2.2 rSLAP1 复配rNp1 和Alcalase进行蛋白水解反应 | 第48页 |
| 4.2.3 甲醛滴定法测定水解产物的水解度 | 第48页 |
| 4.2.4 蛋白水解产物的苦味值测定 | 第48-49页 |
| 4.3 结果与分析 | 第49-50页 |
| 4.3.1 rSLAP1 复配 Alcalase 或rNp1 的水解产物水解度（DH）测定结果 | 第49-50页 |
| 4.3.2 rSLAP1 复配 Alcalase 或rNp1 的水解产物苦味值测定结果 | 第50页 |
| 4.4 本章小结 | 第50-51页 |
| 结论与展望 | 第51-53页 |
| 一、本文结论 | 第51页 |
| 二、本论文的创新之处 | 第51-52页 |
| 三、展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 附录 | 第57-58页 |
| 附录1 slap1 全长基因测序信息 | 第57页 |
| 附录2 本文酱油曲霉菌株LAP1 一级结构序列 | 第57-58页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 附件 | 第60页 |
