| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第11-13页 |
| 第一部分 IL-37 真核表达载体构建 | 第13-21页 |
| 1.1 材料 | 第13页 |
| 1.1.1 载体和菌株 | 第13页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第13页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第13页 |
| 1.2 方法 | 第13-17页 |
| 1.2.1 引物设计与合成 | 第13-14页 |
| 1.2.2 人皮肤组织总 RNA 提取 | 第14页 |
| 1.2.3 RT-PCR 扩增 IL-37 目的基因 | 第14页 |
| 1.2.4 载体和 PCR 产物酶切回收 | 第14-15页 |
| 1.2.5 连接反应 | 第15页 |
| 1.2.6 制备感受态细胞 | 第15页 |
| 1.2.7 转化 | 第15-16页 |
| 1.2.8 菌落 PCR 鉴定阳性克隆 | 第16页 |
| 1.2.9 酶切法鉴定 | 第16-17页 |
| 1.2.10 重组质粒的测序 | 第17页 |
| 1.3 结果 | 第17-20页 |
| 1.3.1 人皮肤中总 RNA 的提取和 RT-PCR 扩增 | 第17-18页 |
| 1.3.2 菌落 PCR 鉴定 | 第18页 |
| 1.3.3 重组质粒酶切鉴定 | 第18-19页 |
| 1.3.4 重组质粒的测序分析 | 第19-20页 |
| 1.4 小结 | 第20-21页 |
| 第二部分 IL-37 原核表达载体的构建 | 第21-30页 |
| 1.1 材料 | 第21页 |
| 1.1.1 菌株和载体 | 第21页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第21页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第21页 |
| 1.2 方法 | 第21-25页 |
| 1.2.1 引物设计与合成 | 第21-22页 |
| 1.2.2 IL-37 成熟蛋白编码基因序列扩增 | 第22页 |
| 1.2.3 重组载体构建及鉴定 | 第22页 |
| 1.2.4 重组蛋白质的诱导表达 | 第22-23页 |
| 1.2.5 诱导蛋白溶解性分析 | 第23页 |
| 1.2.6 重组蛋白质的纯化 | 第23页 |
| 1.2.7 去除内毒素 | 第23-24页 |
| 1.2.8 重组蛋白质 western blot 鉴定 | 第24页 |
| 1.2.9 重组蛋白活性分析 | 第24-25页 |
| 1.3 结果 | 第25-29页 |
| 1.3.1 IL-37 成熟蛋白基因的编码序列 PCR 扩增 | 第25页 |
| 1.3.2 菌落 PCR 鉴定阳性克隆 | 第25-26页 |
| 1.3.3 酶切鉴定重组质粒及基因序列分析 | 第26-27页 |
| 1.3.4 诱导表达 IL-37 蛋白 | 第27-28页 |
| 1.3.5 IL-37 可溶性蛋白分析、纯化及鉴定 | 第28-29页 |
| 1.3.6 去除重组蛋白质内毒素及活性分析 | 第29页 |
| 1.4 小结 | 第29-30页 |
| 第三部分 IL-37 慢病毒载体构建及包装 | 第30-37页 |
| 1.1 材料 | 第30页 |
| 1.1.1 菌株和质粒 | 第30页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第30页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第30页 |
| 1.2 方法 | 第30-33页 |
| 1.2.1 引物设计与合成 | 第30-31页 |
| 1.2.2 IL-37 全长编码序列扩增 | 第31页 |
| 1.2.3 构建 IL-37 慢病毒表达载体并鉴定 | 第31-32页 |
| 1.2.4 慢病毒包装收集 | 第32页 |
| 1.2.5 病毒滴度测定 | 第32-33页 |
| 1.2.6 慢病毒表达 | 第33页 |
| 1.3 结果 | 第33-36页 |
| 1.3.1 重组质粒的鉴定 | 第33-34页 |
| 1.3.2 病毒包装及滴度 | 第34-35页 |
| 1.3.3 慢病毒表达 | 第35-36页 |
| 1.4 小结 | 第36-37页 |
| 第四部分 IL-37 蛋白质和慢病毒抑制小鼠胶原诱导关节炎的作用 | 第37-43页 |
| 1.1 材料 | 第37页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第37页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第37页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第37页 |
| 1.2 方法 | 第37-39页 |
| 1.2.1 复制动物模型并注射蛋白和病毒 | 第37-38页 |
| 1.2.2 检测血清和脾脏中细胞因子 | 第38页 |
| 1.2.3 小鼠关节病理分析 | 第38-39页 |
| 1.3 结果 | 第39-41页 |
| 1.3.1 小鼠关节评分 | 第39-40页 |
| 1.3.2 ELISA 和 RT-PCR 检测血清和脾脏中细胞因子 | 第40-41页 |
| 1.4 小结 | 第41-43页 |
| 结论 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-47页 |
| 附录A 综述 | 第47-56页 |
| 参考文献(References) | 第53-56页 |
| 在学研究成果 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
