| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-20页 |
| 1.1 课题来源 | 第12页 |
| 1.2 课题研究的背景 | 第12-13页 |
| 1.3 国内外研究现状 | 第13-17页 |
| 1.3.1 肺癌中 miRNA 的研究现状 | 第13-15页 |
| 1.3.2 miR-486-5p 的研究现状 | 第15-17页 |
| 1.4 论文的主要研究内容 | 第17-20页 |
| 第二章 材料和方法 | 第20-38页 |
| 2.1 细胞和组织来源 | 第20页 |
| 2.2 试剂及其配制 | 第20-24页 |
| 2.2.1 试剂 | 第20-21页 |
| 2.2.2 试剂配制 | 第21-23页 |
| 2.2.3 试剂盒 | 第23-24页 |
| 2.3 实验仪器 | 第24-25页 |
| 2.4 实验方法 | 第25-38页 |
| 2.4.1 细胞培养 | 第25页 |
| 2.4.2 总 RNA 提取、cDNA 模板制备及实时定量 PCR | 第25-29页 |
| 2.4.2.1 总 RNA 提取 | 第25-26页 |
| 2.4.2.2 反转录反应 | 第26-28页 |
| 2.4.2.3 实时定量 PCR | 第28-29页 |
| 2.4.3 靶基因预测 | 第29页 |
| 2.4.4 重组载体构建 | 第29-32页 |
| 2.4.4.1 引物设计 | 第29-30页 |
| 2.4.4.2 PCR 反应及胶回收 | 第30-31页 |
| 2.4.4.3 双酶切反应 | 第31页 |
| 2.4.4.4 连接与转化 | 第31-32页 |
| 2.4.5 人胚肾细胞 293T 细胞中双萤光素酶报告分析实验 | 第32-33页 |
| 2.4.6 点突变 | 第33-34页 |
| 2.4.7 Western Blot 检测目的蛋白 | 第34-35页 |
| 2.4.8 甲基化酶抑制剂对 miR-486-5p 的影响 | 第35页 |
| 2.4.9 细胞转染 | 第35-36页 |
| 2.4.10 CCK-8 试剂盒测定细胞增殖 | 第36-37页 |
| 2.4.11 结晶紫染色 | 第37页 |
| 2.4.12 细胞周期检测 | 第37-38页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第38-56页 |
| 3.1 MiR-486-5p 在小鼠肺癌肿瘤模型、NSCLC 细胞系和 NSCLC 临床组织样品中的表达量 | 第38-41页 |
| 3.1.1 MiR-486-5p 在小鼠肺癌肿瘤模型中的表达水平 | 第38页 |
| 3.1.2 MiR-486-5p 在 NSCLC 细胞系中的表达水平 | 第38-39页 |
| 3.1.3 MiR-486-5p 在肺癌临床组织中的表达水平 | 第39-40页 |
| 3.1.4 MiR-486-5p 在 NSCLC 细胞系和 NSCLC 临床组织中的表达水平讨论 | 第40-41页 |
| 3.2 MiR-486-5p 的功能 | 第41-46页 |
| 3.2.1 MiR-486-5p 表达载体构建 | 第41页 |
| 3.2.2 MiR-486-5p mimics 和表达载体在 NSCLC 中的上下调情况 | 第41-42页 |
| 3.2.3 过表达 miR-486-5p mimics 和表达载体抑制 NSCLC 细胞增殖 | 第42-43页 |
| 3.2.4 过表达 miR-486-5p mimics 抑制 NSCLC 细胞周期 G1/S 期转化 | 第43-44页 |
| 3.2.5 过表达 miR-486-5p mimics 抑制 NSCLC 细胞克隆形成 | 第44-45页 |
| 3.2.6 MiR-486-5p 的功能讨论 | 第45-46页 |
| 3.3 MiR-486-5p 基因上游甲基化位点实验 | 第46-47页 |
| 3.3.1 NCSCL 细胞经过甲基化抑制酶 AZA 处理之后 miR-486-5p 表达量的变化 | 第46页 |
| 3.3.2 MiR-486-5p 上游甲基化位点 PCR | 第46-47页 |
| 3.3.3 MiR-486-5p 基因上游甲基化位点实验结果讨论 | 第47页 |
| 3.4 MiR-486-5p 靶基因及其功能鉴定 | 第47-56页 |
| 3.4.1 MiR-486-5p 靶基因的预测 | 第47-48页 |
| 3.4.2 MiR-486-5p 靶基因 3′-UTR 和 3′-UTR 突变载体的构建 | 第48页 |
| 3.4.3 双萤光素酶报告基因检测靶基因CDK43′-UTR 被miR-486-5p 调控 | 第48-49页 |
| 3.4.4 靶基因 CDK4 在 NSCLC 细胞和肺癌临床组织样本中的表达 | 第49-50页 |
| 3.4.5 过表达 miR-486-5p 调控靶基因 CDK4 在 mRNA 和蛋白水平的表达量 | 第50-51页 |
| 3.4.6 过表达靶基因 CDK4 siRNA 序列抑制其 mRNA 和蛋白表达量 | 第51-52页 |
| 3.4.7 过表达靶基因 CDK4 siRNA 序列抑制 NSCLC 细胞增殖 | 第52-53页 |
| 3.4.8 过表达靶基因 CDK4 siRNA 序列抑制 NSCLC 细胞周期 | 第53-54页 |
| 3.4.9 过表达靶基因 CDK4 siRNA 序列抑制细胞克隆形成 | 第54-55页 |
| 3.4.10 MiR-486-5p 靶基因及其功能鉴定研究讨论 | 第55-56页 |
| 第四章 结论与展望 | 第56-60页 |
| 4.1 结论 | 第56-58页 |
| 4.2 展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 作者在攻读硕士学位期间的学术成果 | 第66-67页 |
| 作者在攻读硕士学位期间参与的项目 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
