| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 第一部分 上调 HSP70-2 基因在鼻咽癌细胞 6-10B 增殖与凋亡中的作用 | 第11-47页 |
| 第一章 前言 | 第11-19页 |
| 1 关于 Gateway 技术 | 第11-12页 |
| 1.1 Gateway 技术的原理 | 第11-12页 |
| 1.2 本研究应用的 Gateway 技术 | 第12页 |
| 2 慢病毒表达系统 | 第12-15页 |
| 2.1 慢病毒的介绍 | 第12-15页 |
| 2.2 本研究应用的慢病毒表达系统 | 第15页 |
| 3 HSP70-2 基因对肿瘤的影响 | 第15-16页 |
| 4 鼻咽癌的研究进展 | 第16-17页 |
| 5 研究目的及意义 | 第17-18页 |
| 6 技术路线 | 第18-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-35页 |
| 1 实验材料 | 第19-24页 |
| 1.1 主要材料 | 第19页 |
| 1.2 常用试剂 | 第19-20页 |
| 1.3 主要仪器 | 第20-21页 |
| 1.4 试剂配制 | 第21-24页 |
| 1.5 引物序列 | 第24页 |
| 2 方法 | 第24-35页 |
| 2.1 HSP70-2 基因引物合成和 PCR 扩增 | 第24-26页 |
| 2.2 SacI/KpnI 双酶切鉴定 pEntry221-MCS-IRES/eGFP 供体载体 | 第26页 |
| 2.3 酶切连接构建 pEntry221-HSP70-2-IRES/eGFP 入门载体 | 第26-27页 |
| 2.4 pEntry221-HSP70-2-IRES/eGFP 和 pEntry221-MCS-IRES/eGFP 载体转化和检测 | 第27-28页 |
| 2.5 LR 反应体系构建及检测 pLV-HSP70-2-IRES/eGFP-Neo 目的载体 | 第28-29页 |
| 2.5.1 构建 pLV-HSP70-2-IRES/eGFP-Neo 目的载体 | 第28页 |
| 2.5.2 菌落 PCR 检测 pLV-HSP70-2-IRES/eGFP-Neo 目的载体 | 第28-29页 |
| 2.6 LR 反应体系构建及检测 pLV-CMV-eGFP-Neo 空载体 | 第29-30页 |
| 2.6.1 构建 pLV-CMV-eGFP-Neo 空载体 | 第29页 |
| 2.6.2 菌落 PCR 检测 pLV-CMV-eGFP-Neo 空载体 | 第29-30页 |
| 2.7 空载和 HSP70-2 慢病毒载体的转染与病毒颗粒的收集和浓缩 | 第30-31页 |
| 2.8 慢病毒滴度的测定 | 第31页 |
| 2.9 慢病毒转导 6-10B 细胞及 G418 筛选 | 第31页 |
| 2.10 Western blotting 检测 hsp70-2 蛋白表达 | 第31-33页 |
| 2.11 CCK8 检测细胞增殖率 | 第33页 |
| 2.12 流式细胞仪检测细胞周期 | 第33-34页 |
| 2.13 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第34-35页 |
| 第三章 实验结果 | 第35-44页 |
| 1 PCR 扩增 HSP70-2 基因结果 | 第35页 |
| 2 SacI/KpnI 双酶切鉴定 pEntry221-MCS-IRES/eGFP 载体结果 | 第35-36页 |
| 3 EcoRI/XhoI 双酶切鉴定 pEntry221-HSP70-2-IRES/eGFP 入门载体结果 | 第36-37页 |
| 4 菌落 PCR 检测 pLV-HSP70-2-IRES/eGFP-Neo 目的载体结果 | 第37页 |
| 5 菌落 PCR 检测 pLV-CMV-eGFP-Neo 空载体结果 | 第37-38页 |
| 6 慢病毒滴度的测定结果 | 第38页 |
| 7 G418 筛选的结果 | 第38-39页 |
| 8 Western blotting 检测 hsp70-2 蛋白表达结果 | 第39-40页 |
| 9 CCK8 检测细胞增殖率结果 | 第40-41页 |
| 10 流式细胞仪检测细胞周期结果 | 第41-42页 |
| 11 流式细胞仪检测细胞凋亡结果 | 第42-44页 |
| 第四章 讨论 | 第44-47页 |
| 1 上调 HSP70-2 基因在鼻咽癌细胞 6-10B 增殖与凋亡中的作用 | 第44-45页 |
| 2 Gateway 技术应用及问题 | 第45页 |
| 3 慢病毒表达系统应用及问题 | 第45-46页 |
| 4 G418 筛选问题 | 第46-47页 |
| 第二部分 下调 HSP70-2 基因在鼻咽癌细胞 6-10B 和 5-8F 增殖与凋亡中的作用 | 第47-66页 |
| 第一章 前言 | 第47-49页 |
| 1 异黄酮对肿瘤的影响 | 第47页 |
| 2 研究目的及意义 | 第47-48页 |
| 3 技术路线 | 第48-49页 |
| 第二章 材料与方法 | 第49-54页 |
| 1 实验材料 | 第49-51页 |
| 1.1 主要材料 | 第49页 |
| 1.2 常用试剂 | 第49-50页 |
| 1.3 主要仪器 | 第50-51页 |
| 1.4 ZSGS-4 溶液配制 | 第51页 |
| 2 方法 | 第51-54页 |
| 2.1 Western blotting 测定 hsp70-2 蛋白表达 | 第51-52页 |
| 2.2 CCK8 检测细胞抑制率 | 第52页 |
| 2.3 流式细胞仪检测细胞周期 | 第52-53页 |
| 2.4 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第53-54页 |
| 第三章 实验结果 | 第54-63页 |
| 1 Western blotting 检测 hsp70-2 蛋白表达结果 | 第54-56页 |
| 2 CCK8 检测细胞抑制率结果 | 第56-58页 |
| 3 流式细胞仪检测细胞周期结果 | 第58-60页 |
| 4 流式细胞仪检测细胞凋亡结果 | 第60-63页 |
| 第四章 讨论 | 第63-66页 |
| 1 ZSGS-4 对鼻咽癌细胞 6-10B 和 5-8F 的 hsp70-2 蛋白表达的影响 | 第63页 |
| 2 下调 HSP70-2 基因对鼻咽癌细胞 6-10B 和 5-8F 增殖率的影响 | 第63-64页 |
| 3 下调 HSP70-2 基因在鼻咽癌细胞 6-10B 和 5-8F 周期中的作用 | 第64页 |
| 4 下调 HSP70-2 基因在鼻咽癌细胞 6-10B 和 5-8F 凋亡中的作用 | 第64-66页 |
| 本文结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-76页 |
| 附录 | 第76-80页 |
| 缩词简表 | 第80-81页 |
| 在学期间发表论文清单 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
