摘要 | 第5-6页 |
ABSTRACT | 第6-7页 |
第一章 文献综述 | 第10-21页 |
1.1 杆状病毒概述 | 第10-15页 |
1.1.1 杆状病毒的分类 | 第10页 |
1.1.2 杆状病毒的生活史 | 第10-13页 |
1.1.3 杆状病毒的应用 | 第13-15页 |
1.2 重组杆状病毒杀虫剂概述 | 第15-17页 |
1.2.1 表达酶和激素的重组杆状病毒 | 第15-16页 |
1.2.2 表达昆虫特异性毒素的重组杆状病毒 | 第16-17页 |
1.2.3 缺失病毒非必需基因的重组杆状病毒 | 第17页 |
1.2.4 插入增效蛋白的重组杆状病毒 | 第17页 |
1.3 蝎毒素的研究概述 | 第17-19页 |
1.3.1 蝎毒素分类 | 第18页 |
1.3.2 蝎毒素的应用价值 | 第18-19页 |
1.4 本研究的目的意义 | 第19-21页 |
第二章 材料与方法 | 第21-30页 |
2.1 实验材料 | 第21页 |
2.1.1 载体、菌株、病毒、细胞系及试虫 | 第21页 |
2.1.2 主要生化试剂及试剂盒 | 第21页 |
2.1.3 实验常用试剂配置 | 第21页 |
2.1.4 引物设计 | 第21页 |
2.2 实验方法 | 第21-30页 |
2.2.1 碱裂解法提取质粒 DNA | 第21-22页 |
2.2.2 酶切与链接反应 | 第22-23页 |
2.2.3 氯化钙转化感受态细胞的方法 | 第23页 |
2.2.4 电转化感受态细胞的方法 | 第23页 |
2.2.5 PCR 扩增反应 | 第23-24页 |
2.2.6 目的基因的重组 | 第24页 |
2.2.7 目的基因的转座 | 第24页 |
2.2.8 从细菌中提取 bacmid DNA | 第24-25页 |
2.2.9 昆虫细胞的转染 | 第25页 |
2.2.10 病毒细胞的扩繁 | 第25页 |
2.2.11 病毒滴度的测定 | 第25页 |
2.2.12 病毒生长曲线的测定 | 第25-26页 |
2.2.13 定量 PCR 分析病毒 DNA 复制 | 第26页 |
2.2.14 从细胞中提取 RNA 并 RT-PCR 分析病毒转录 | 第26页 |
2.2.15 重组病毒的投射电镜观察 | 第26-27页 |
2.2.16 重组病毒的虫体扩繁与纯化 | 第27页 |
2.2.17 重组病毒的生物测定 | 第27-28页 |
2.2.18 实验载体示意图及技术路线 | 第28-30页 |
第三章 重组病毒 RjAa17f-HearNPV 的构建及生物学分析 | 第30-41页 |
3.1 HtEc-RjAa17f 载体的双酶切鉴定 | 第30页 |
3.2 RjAa17f 重组 HaBacHZ8 的鉴定 | 第30-33页 |
3.2.1 RjAa17f 重组 HaBacHZ8 的 PCR 鉴定 | 第31-32页 |
3.2.2 RjAa17f 重组 HaBacHZ8 的 Hind Ⅲ酶切鉴定 | 第32-33页 |
3.3 恢复 HaBacHZ8-RjAa17f 的多角体基因 | 第33-34页 |
3.3.1 辅助质粒(pMON7124)转化 E.coli HaBacHZ8-RjAa17f | 第33-34页 |
3.3.2 ph 基因恢复 HaBacHZ8-RjAa17f | 第34页 |
3.4 RjAa17f-HearNPV 病毒粒子的获得 | 第34-36页 |
3.5 重组 RjAa17f-HearNPV 的生长曲线 | 第36页 |
3.6 重组 RjAa17f-HearNPV 的 DNA 复制曲线 | 第36-38页 |
3.7 重组病毒细胞转录水平分析 | 第38-39页 |
3.8 重组病毒透射电镜分析 | 第39页 |
3.9 重组病毒的生物测定 | 第39-41页 |
第四章 结论与讨论 | 第41-43页 |
4.1 结论 | 第41-42页 |
4.2 讨论 | 第42-43页 |
参考文献 | 第43-48页 |
附录 | 第48-50页 |
致谢 | 第50-51页 |
作者简介 | 第51页 |