| 缩略词 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 研究背景和立题依据 | 第12-23页 |
| 1.1 木霉-植物-植物病原微生物相互作用 | 第12-15页 |
| 1.1.1 木霉-植物病原微生物相互作用 | 第12页 |
| 1.1.2 木霉-植物的相互作用 | 第12-14页 |
| 1.1.2.1 木霉诱导植物抗性 | 第12页 |
| 1.1.2.2 木霉对植物促生作用 | 第12-14页 |
| 1.1.3 木霉制剂在农业生产中的应用 | 第14-15页 |
| 1.2 非核糖体合成肽peptaibols的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.2.1 Peptaibols的来源与结构特征 | 第15页 |
| 1.2.2 Peptaibols的生物学活性 | 第15-17页 |
| 1.2.2.1 Peptaibols的抗菌活性 | 第15-16页 |
| 1.2.2.2 Peptaibols对动物细胞活性的影响 | 第16页 |
| 1.2.2.3 Peptaibols对植物细胞活性的影响 | 第16-17页 |
| 1.2.3 Peptaibols的生物合成 | 第17-18页 |
| 1.3 木霉蛋白酶的研究及其在生物防治中的应用 | 第18-20页 |
| 1.3.1 木霉蛋白酶的研究 | 第18-19页 |
| 1.3.2 木霉产蛋白酶的抗真菌活性研究 | 第19-20页 |
| 1.3.3 木酶蛋白酶杀线虫活性的研究 | 第20页 |
| 1.4 立题依据 | 第20-23页 |
| 第二章 长枝木霉SMF2 peptaibols合成酶基因缺失突变株的构建 | 第23-47页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 材料和方法 | 第23-35页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第23页 |
| 2.2.2 培养基和溶液 | 第23-25页 |
| 2.2.2.1 培养基 | 第23-24页 |
| 2.2.2.2 溶液配制 | 第24-25页 |
| 2.2.3 主要试剂和仪器 | 第25-26页 |
| 2.2.3.1 主要试剂 | 第25页 |
| 2.2.3.2 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.2.4 Peptaibols合成酶基因敲除同源重组载体构建 | 第26-29页 |
| 2.2.4.1 △tpxl敲除盒的构建 | 第26-28页 |
| 2.2.4.2 △tpx2敲除盒的构建 | 第28-29页 |
| 2.2.5 SMF2原生质体制备 | 第29页 |
| 2.2.5.1 SMF2菌丝培养 | 第29页 |
| 2.2.5.2 菌丝收集酶解 | 第29页 |
| 2.2.5.3 原生质体收集 | 第29页 |
| 2.2.6 SMF2原生质体转化与再生 | 第29-31页 |
| 2.2.6.1 敲除质粒的线性化 | 第29-30页 |
| 2.2.6.2 固体再生培养基B中CsCl浓度的选择 | 第30页 |
| 2.2.6.3 原生质体转化与再生 | 第30-31页 |
| 2.2.7 转化子筛选 | 第31-32页 |
| 2.2.7.1 转化子纯化 | 第31页 |
| 2.2.7.2 SMF2总DNA提取 | 第31页 |
| 2.2.7.3 转化子PCR筛选 | 第31-32页 |
| 2.2.8 转化子的Southern杂交验证 | 第32-34页 |
| 2.2.8.1 杂交探针的制备 | 第32页 |
| 2.2.8.2 基因组DNA提取和酶切 | 第32-33页 |
| 2.2.8.3 凝胶电泳 | 第33页 |
| 2.2.8.4 转膜 | 第33页 |
| 2.2.8.5 预杂交与杂交 | 第33-34页 |
| 2.2.8.6 洗膜与显影 | 第34页 |
| 2.2.9 转化子的稳定性检测 | 第34页 |
| 2.2.10 突变体表型分析 | 第34-35页 |
| 2.2.10.1 菌落形态 | 第34页 |
| 2.2.10.2 Peptaibols的HPLC分析 | 第34页 |
| 2.2.10.3 SMF2固体发酵粗提物对土传病原真菌的抑制作用 | 第34-35页 |
| 2.2.10.4 SMF2野生型和突变子与土传病原真菌的对峙培养 | 第35页 |
| 2.3 结果与分析 | 第35-45页 |
| 2.3.1 Peptaibols合成酶基因敲除同源重组载体的构建 | 第35-38页 |
| 2.3.1.1 tpx1敲除载体构建 | 第35-36页 |
| 2.3.1.2 tpx2敲除载体构建 | 第36-38页 |
| 2.3.2 SMF2原生质体制备 | 第38-39页 |
| 2.3.3 MM培养基中CsCl浓度选择(tpx2敲除) | 第39页 |
| 2.3.4 转化子PCR筛选 | 第39-40页 |
| 2.3.5 转化子Southern杂交验证 | 第40-41页 |
| 2.3.6 突变株表型分析 | 第41-45页 |
| 2.3.6.1 SMF2和其peptaibols缺失突变子的菌落形态 | 第41-42页 |
| 2.3.6.2 长枝木霉SMF2和peptaibols缺失突变子产peptaibols分析 | 第42-43页 |
| 2.3.6.3 SMF2固体发酵粗提液与土壤病原真菌拮抗作用 | 第43-44页 |
| 2.3.6.4 SMF2野生型和突变子与土传病原真菌拮抗作用 | 第44-45页 |
| 2.4 讨论 | 第45-47页 |
| 第三章 Peptaibols在长枝木霉SMF2与植物互作中的作用 | 第47-55页 |
| 3.1 引言 | 第47页 |
| 3.2 材料和方法 | 第47-48页 |
| 3.2.1 菌株和种子 | 第47页 |
| 3.2.2 不同浓度SMF2孢子对番茄幼苗生长的影响 | 第47-48页 |
| 3.2.3 木霉野生型及其peptaibols缺失突变株对番茄幼苗生长的影响 | 第48页 |
| 3.2.4 番茄幼苗生物学指标的检测 | 第48页 |
| 3.2.4.1 番茄株高,茎粗,鲜重检测 | 第48页 |
| 3.2.4.2 番茄根系扫描 | 第48页 |
| 3.2.5 统计方法 | 第48页 |
| 3.3 结果和讨论 | 第48-53页 |
| 3.3.1 不同浓度孢子对番茄生长影响 | 第48-49页 |
| 3.3.2 SMF2及其peptaibols缺失突变株对番茄幼苗生长及根系发育的影响 | 第49-53页 |
| 3.3.2.1 Peptaibols缺失对木霉对番茄幼苗促生作用的影响 | 第49-50页 |
| 3.3.2.2 Peptaibols缺失对木霉促进植物根系发育的影响 | 第50-53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 长枝木霉SMF2丝氨酸蛋白酶sprT缺失突变株的构建 | 第55-67页 |
| 4.1 引言 | 第55页 |
| 4.2 材料和方法 | 第55-59页 |
| 4.2.1 菌株和质粒 | 第55页 |
| 4.2.2 主要试剂和仪器设备 | 第55页 |
| 4.2.2.1 主要试剂 | 第55页 |
| 4.2.2.2 主要仪器设备 | 第55页 |
| 4.2.3 SMF2丝氨酸蛋白酶sprT基因敲除载体构建 | 第55-56页 |
| 4.2.4 SMF2原生质体制备和转化 | 第56-57页 |
| 4.2.5 SMF2转化子PCR筛选和纯化 | 第57页 |
| 4.2.6 SMF2转化子Southern印记验证 | 第57页 |
| 4.2.7 SMF2转化子sprT基因转录qPCR分析 | 第57-58页 |
| 4.2.7.1 SMF2转化子总RNA提取 | 第57页 |
| 4.2.7.2 RT-PCR | 第57-58页 |
| 4.2.7.3 qPCR分析 | 第58页 |
| 4.2.8 SMF2野生型和突变子蛋白酶酶活检测 | 第58-59页 |
| 4.2.8.1 蛋白酶粗酶液的制备 | 第58-59页 |
| 4.2.8.2 蛋白酶酶活测定方法 | 第59页 |
| 4.2.8.3 活性电泳检测突变子产蛋白酶情况 | 第59页 |
| 4.2.9 SMF2和sprT缺失突变子与土壤病原真菌拮抗作用 | 第59页 |
| 4.3 结果与分析 | 第59-65页 |
| 4.3.1 sprT基因敲除载体构建 | 第59-60页 |
| 4.3.2 转化子筛选 | 第60-61页 |
| 4.3.3 Southern Blotting验证转化子△sprT40-2 | 第61页 |
| 4.3.4 转化子△sprT40-2丝氨酸蛋白酶sprT表达分析 | 第61-64页 |
| 4.3.4.1 转化子△sprT40-2丝氨酸蛋白酶sprT基因qPCR表达 | 第62页 |
| 4.3.4.2 转化子△sprT40-2发酵产物蛋白酶活性检测 | 第62-63页 |
| 4.3.4.3 转化子△sprT40-2固体发酵粗酶液酶活检测 | 第63-64页 |
| 4.3.5 转化子△sprT40-2表型分析 | 第64-65页 |
| 4.3.5.1 转化子△sprT40-2菌落形态 | 第64页 |
| 4.3.5.2 SMF2转化子△sprT40-2与土壤病原真菌的拮抗作用 | 第64-65页 |
| 4.4 讨论 | 第65-67页 |
| 全文总结与展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 学位论文评闽及答辩情况表 | 第75页 |
