| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略词表 | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-18页 |
| 第一章 O-GlcNAc修饰抑制剂DON调节节律基因表达 | 第18-31页 |
| 1.1 材料 | 第18-23页 |
| 1.1.1 质粒、细胞株来源 | 第18页 |
| 1.1.2 实验仪器、分析软件 | 第18-19页 |
| 1.1.3 实验试剂与耗材 | 第19-21页 |
| 1.1.4 溶液配制 | 第21-23页 |
| 1.2 方法 | 第23-28页 |
| 1.2.1 3T3-Bmal1-luc稳转株细胞的培养 | 第23-24页 |
| 1.2.2 3T3-Bmal1-luc稳转株细胞的同步化 | 第24页 |
| 1.2.3 实时昼夜节律性光度测定 | 第24-25页 |
| 1.2.4 Western Blot检测细胞蛋白O-GlcNAc修饰水平 | 第25-28页 |
| 1.3 结果 | 第28-29页 |
| 1.3.1 Real time bioluminescence recording监测细胞节律 | 第28-29页 |
| 1.3.2 DON下调细胞总蛋白O-GlcNAc修饰程度 | 第29页 |
| 1.4 讨论 | 第29-31页 |
| 第二章 O-GlcNAc修饰节律蛋白BMAL1 | 第31-45页 |
| 2.1 材料 | 第31-36页 |
| 2.1.1 质粒、菌株、细胞株、组织来源 | 第31页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第31-32页 |
| 2.1.3 实验试剂与耗材 | 第32-34页 |
| 2.1.4 溶液配制 | 第34-36页 |
| 2.2 方法 | 第36-41页 |
| 2.2.1 sWGA富集外源性FLAG-BMAL1融合蛋白 | 第36-37页 |
| 2.2.2 sWGA富集NIH3T3细胞中内源性BMAL1蛋白 | 第37-39页 |
| 2.2.3 免疫共沉淀检测外源性FLAG-BMAL1融合蛋白O-GlcNAc修饰 | 第39-40页 |
| 2.2.4 sWGA富集同步化NIH3T3细胞内源性BMAL1蛋白 | 第40页 |
| 2.2.5 sWGA富集小鼠肝脏内源性BMAL1蛋白 | 第40-41页 |
| 2.3 结果 | 第41-43页 |
| 2.3.1 sWGA富集外源性FLAG-BMAL1融合蛋白 | 第41页 |
| 2.3.2 sWGA富集内源性BMAL1蛋白 | 第41-42页 |
| 2.3.3 免疫共沉淀检测外源性FLAG-BMAL1融合蛋白O-GlcNAc修饰 | 第42页 |
| 2.3.4 sWGA富集同步化NIH3T3细胞内源性BMAL1蛋白 | 第42页 |
| 2.3.5 sWGA富集小鼠肝脏内源性BMAL1蛋白 | 第42-43页 |
| 2.4 讨论 | 第43-45页 |
| 第三章 节律蛋白BMAL1与OGT的相互作用 | 第45-51页 |
| 3.1 材料 | 第45-47页 |
| 3.1.1 质粒、菌株、细胞株来源 | 第45页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第45页 |
| 3.1.3 实验试剂与耗材 | 第45-46页 |
| 3.1.4 溶液配制 | 第46-47页 |
| 3.2 方法 | 第47-49页 |
| 3.2.1 免疫共沉淀检测BMAL1与OGT的相互作用 | 第47页 |
| 3.2.2 GST pull down检测BMAL1与OGT的相互作用 | 第47-49页 |
| 3.3 结果 | 第49页 |
| 3.3.1 免疫共沉淀检测BMAL1与OGT的相互作用 | 第49页 |
| 3.3.2 GST pull down检测BMAL1与OGT的相互作用 | 第49页 |
| 3.4 讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 O-GlcNAc修饰调节节律蛋白BMAL1稳定性 | 第51-57页 |
| 4.1 材料 | 第51-52页 |
| 4.1.1 质粒、细胞株来源 | 第51页 |
| 4.1.2 实验仪器、分析软件 | 第51页 |
| 4.1.3 实验试剂与耗材 | 第51-52页 |
| 4.1.4 溶液配制 | 第52页 |
| 4.2 方法 | 第52-53页 |
| 4.2.1 O-GlcNAc修饰调节内源性BMAL1蛋白稳定性 | 第52-53页 |
| 4.2.2 O-GlcNAc修饰调节外源性FLAG-BMAL1蛋白稳定性 | 第53页 |
| 4.3 结果 | 第53-55页 |
| 4.3.1 DON处理降低内源性BMAL1蛋白稳定性 | 第53-54页 |
| 4.3.2 过表达OGA降低外源性FLAG-BMAL1蛋白稳定性 | 第54-55页 |
| 4.4 讨论 | 第55-57页 |
| 第五章 O-GlcNAc修饰调节CLOCK/BMAL1转录活性 | 第57-68页 |
| 5.1 材料 | 第57-60页 |
| 5.1.1 质粒、细胞株来源 | 第57页 |
| 5.1.2 实验仪器、分析软件 | 第57-58页 |
| 5.1.3 实验试剂与耗材 | 第58-59页 |
| 5.1.4 溶液配制 | 第59-60页 |
| 5.1.5 Real time PCR引物 | 第60页 |
| 5.2 方法 | 第60-65页 |
| 5.2.1 过表达OGA对CLOCK/BMAL1转录活性的影响研究 | 第60-62页 |
| 5.2.2 DON处理对CLOCK/BMAL1转录活性的影响研究 | 第62页 |
| 5.2.3 O-GlcNAc修饰调节CLOCK/BMAL1下游基因表达 | 第62-65页 |
| 5.3 结果 | 第65-66页 |
| 5.3.1 过表达OGA对CLOCK/BMAL1转录活性的影响研究 | 第65页 |
| 5.3.2 DON处理对CLOCK/BMAL1转录活性的影响研究 | 第65-66页 |
| 5.3.3 实时荧光定量PCR检测节律基因表达 | 第66页 |
| 5.4 讨论 | 第66-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 综述 | 第77-90页 |
| 参考文献 | 第85-90页 |
| 攻读硕士学位期间主要研究成果 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
