| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 前言 | 第8-14页 |
| 1.1 hTSHR与自身免疫性甲状腺疾病 | 第8-9页 |
| 1.2 hTSHR研究进展 | 第9-12页 |
| 1.2.1 hTSHR基因的发现 | 第9-10页 |
| 1.2.2 hTSHR基因编码的hTSHR蛋白的结构 | 第10-11页 |
| 1.2.3 hTSHR蛋白的功能 | 第11-12页 |
| 1.3 大肠杆菌表达系统 | 第12-13页 |
| 1.3.1 表达载体 | 第12-13页 |
| 1.3.2 表达宿主菌 | 第13页 |
| 1.4 研究目的、方法 | 第13-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-16页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第14页 |
| 2.1.2 试剂、耗材、菌株 | 第14-15页 |
| 2.1.3 主要溶液的配制 | 第15-16页 |
| 2.2 目的基因片段的获取 | 第16-17页 |
| 2.2.1 引物合成 | 第16页 |
| 2.2.2 PCR扩增hTSHR片段 | 第16-17页 |
| 2.3 原核表达载体的线性化 | 第17-19页 |
| 2.3.1 pET-28a(+)原核表达质粒载体信息 | 第18-19页 |
| 2.3.2 pET-28a(+)原核表达质粒酶切 | 第19页 |
| 2.4 重组克隆的制备 | 第19-21页 |
| 2.4.1 制备感受态细胞 | 第19-20页 |
| 2.4.2 PCR产物交换连接入线性化表达载体 | 第20页 |
| 2.4.3 转化 | 第20-21页 |
| 2.5 阳性克隆的PCR鉴定 | 第21-22页 |
| 2.6 重组质粒pET-28a(+)-hTSHR转化工程菌BL21(DE3) | 第22-23页 |
| 2.6.1 从大肠杆菌Top10中提取重组质粒 | 第22-23页 |
| 2.6.2 重组质粒转化BL21(DE3)菌株 | 第23页 |
| 2.7 目的蛋白的诱导表达 | 第23页 |
| 2.8 目的蛋白诱导表达条件的优化 | 第23-24页 |
| 2.8.1 诱导剂浓度的优化 | 第23-24页 |
| 2.8.2 诱导时间的优化 | 第24页 |
| 2.9 目的蛋白免疫活性的分析 | 第24页 |
| 2.10 目的蛋白表达形式的分析 | 第24页 |
| 2.11 目的蛋白的检测及鉴定 | 第24-27页 |
| 2.11.1 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第24-26页 |
| 2.11.2 Westernblotting检测 | 第26-27页 |
| 第三章 结果与分析 | 第27-36页 |
| 3.1 PCR扩增hTSHR片段 | 第27页 |
| 3.2 载体线性化 | 第27-28页 |
| 3.3 阳性克隆的PCR鉴定 | 第28-29页 |
| 3.4 阳性克隆测序结果 | 第29-31页 |
| 3.5 hTSHR的诱导表达 | 第31-32页 |
| 3.6 目的蛋白表达条件的优化 | 第32-34页 |
| 3.7 目的蛋白免疫活性检测 | 第34-35页 |
| 3.8 目的蛋白的表达形式 | 第35-36页 |
| 第四章 讨论 | 第36-41页 |
| 4.1 重组质粒pET-28a(+)-hTSHR的构建 | 第36-39页 |
| 4.2 hTSHR蛋白的表达与鉴定 | 第39-41页 |
| 研究成果与展望 | 第41-42页 |
| 一、研究成果 | 第41页 |
| 二、不足与展望 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-45页 |
| 缩略语表 | 第45-47页 |
| 附录:阳性克隆测序结果 | 第47-49页 |
| 在学期间的研究成果 | 第49-50页 |
| 一、发表论文 | 第49页 |
| 二、参与科研 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50页 |
