| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 缩略语 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-18页 |
| 研究现状、成果 | 第12-15页 |
| 研究目的、方法 | 第15-18页 |
| 一、肝细胞癌中WIF-1启动子区CpG岛甲基化状态的研究 | 第18-40页 |
| ·对象和方法 | 第18-26页 |
| ·临床标本 | 第18页 |
| ·临床资料的采集 | 第18页 |
| ·试剂及耗材的来源、配制 | 第18-20页 |
| ·实验仪器 | 第20-21页 |
| ·肝组织中基因组DNA的提取 | 第21页 |
| ·组织DNA的亚硫酸氢化处理 | 第21-22页 |
| ·MSP引物、探针的设计与合成 | 第22-23页 |
| ·体外DNA的甲基化修饰 | 第23页 |
| ·MSP及Q-MSP扩增条件 | 第23-24页 |
| ·冰冻榨取DNA、回收与纯化 | 第24页 |
| ·DNA与克隆载体的连接,T-A克隆 | 第24-25页 |
| ·MSP产物测序分析 | 第25-26页 |
| ·Q-MSP数据的处理 | 第26页 |
| ·统计学分析 | 第26页 |
| ·实验结果 | 第26-36页 |
| ·肝癌患者临床资料及随访结果 | 第26-27页 |
| ·不同肝组织DNA的抽提 | 第27-28页 |
| ·MSP结果 | 第28页 |
| ·克隆测序的结果与验证 | 第28-30页 |
| ·扩增片段序列与预期序列的比对分析 | 第30-31页 |
| ·Q-MSP结果 | 第31-33页 |
| ·WIF-1基因甲基化水平诊断价值的评估 | 第33页 |
| ·肝癌组织中WIF-1基因甲基化水平与临床资料的的相关性分析 | 第33-35页 |
| ·WIF-1基因甲基化与无瘤生存期的关系 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 二、WIF-1基因mRNA在肝细胞癌中的表达 | 第40-55页 |
| ·对象和方法 | 第40-43页 |
| ·标本来源及临床资料的采集 | 第40页 |
| ·实验耗材及配制 | 第40-41页 |
| ·实验仪器 | 第41页 |
| ·mRNA的提取 | 第41页 |
| ·逆转录反应 | 第41-42页 |
| ·引物与探针的设计与合成 | 第42页 |
| ·Q-RT-PCR扩增条件 | 第42页 |
| ·Q-RT-PCR数据处理 | 第42-43页 |
| ·统计学分析 | 第43页 |
| ·结果 | 第43-52页 |
| ·总RNA完整性及纯度鉴定 | 第43页 |
| ·Q-RT-PCR | 第43-46页 |
| ·WIF-1 mRNA表达与临床资料的关系 | 第46-51页 |
| ·WIF-1 mRNA表达与无瘤生存期的关系 | 第51页 |
| ·WIF-1甲基化状态与WIF-1 mRNA表达的关系 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| ·小结 | 第54-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-59页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第59-60页 |
| 附录 | 第60-63页 |
| 综述 肝细胞癌与DNA甲基化的研究进展 | 第63-71页 |
| 综述参考文献 | 第68-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
