| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 绪论 | 第12-43页 |
| 1.1 细胞分泌与调控 | 第12-24页 |
| 1.1.1 囊泡的产生和循环 | 第12-14页 |
| 1.1.2 细胞分泌的调控蛋白 | 第14-24页 |
| 1.2 Synaptotagmin 与分泌调节 | 第24-32页 |
| 1.2.1 Syt 的结构 | 第24-25页 |
| 1.2.2 Syt 的分类与定位 | 第25-26页 |
| 1.2.3 Syt 对细胞分泌的调控及分子机制 | 第26-31页 |
| 1.2.4 Syt 参与囊泡的锚定与激活过程和胞吞活动的调控 | 第31-32页 |
| 1.3 RNA 干扰技术 | 第32-40页 |
| 1.3.1 RNAi 的研究历程 | 第32-33页 |
| 1.3.2 RNAi 的分子机制 | 第33-35页 |
| 1.3.3 RNAi 的作用特征 | 第35-36页 |
| 1.3.4 RNAi 的设计原则与方法 | 第36-37页 |
| 1.3.5 siRNA 的制备 | 第37-38页 |
| 1.3.6 RNAi 的应用 | 第38-40页 |
| 1.3.6.1 基因功能研究 | 第39页 |
| 1.3.6.2 病毒性疾病 | 第39-40页 |
| 1.3.6.3 抗肿瘤治疗 | 第40页 |
| 1.3.6.4 新药开发 | 第40页 |
| 1.4 本文的研究目的、意义与主要内容 | 第40-43页 |
| 1.4.1 研究目的与意义 | 第40-42页 |
| 1.4.2 本文的主要研究内容 | 第42-43页 |
| 2 shRNA 表达载体的构建与鉴定 | 第43-53页 |
| 2.1 实验材料 | 第43-45页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第43页 |
| 2.1.2 酶和试剂 | 第43-44页 |
| 2.1.3 宿主菌 | 第44页 |
| 2.1.4 细胞与质粒 | 第44-45页 |
| 2.1.5 电泳缓冲液及培养基 | 第45页 |
| 2.2 实验方法 | 第45-48页 |
| 2.2.1 DNA 的常规操作方法 | 第45页 |
| 2.2.2 shRNA 质粒的构建 | 第45-47页 |
| 2.2.3 shRNA 表达载体的转染 | 第47页 |
| 2.2.4 shRNA 表达载体的构建 | 第47-48页 |
| 2.3 结果 | 第48-51页 |
| 2.3.1 质粒 pRNAT-H1.1/Shuttle-RFP 的构建 | 第48-50页 |
| 2.3.2 shRNA 表达载体的构建 | 第50-51页 |
| 2.4 讨论 | 第51-53页 |
| 3 人胚肾 293a 细胞的转染条件与优化 | 第53-65页 |
| 3.1 实验材料 | 第54-56页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第54页 |
| 3.1.2 试剂 | 第54页 |
| 3.1.3 宿主菌 | 第54页 |
| 3.1.4 细胞与质粒 | 第54-56页 |
| 3.2 实验方法 | 第56-57页 |
| 3.2.1 DNA 的提取 | 第56页 |
| 3.2.2 质粒的转染 | 第56-57页 |
| 3.2.3 转染效率 | 第57页 |
| 3.3 结果 | 第57-63页 |
| 3.3.1 转染条件优化 | 第57-59页 |
| 3.3.2 共转效率 | 第59-61页 |
| 3.3.3 先后转染的共转效率 | 第61-63页 |
| 3.4 讨论 | 第63-65页 |
| 4 Syt1 基因沉默效果的检测 | 第65-79页 |
| 4.1 实验材料 | 第66-69页 |
| 4.1.1 实验仪器 | 第66页 |
| 4.1.2 分子生化试剂 | 第66-67页 |
| 4.1.3 常用溶液配制 | 第67-68页 |
| 4.1.4 细胞与质粒 | 第68页 |
| 4.1.5 RT-PCR 引物的设计与合成 | 第68-69页 |
| 4.2 实验方法 | 第69-72页 |
| 4.2.1 细胞培养与转染 | 第69页 |
| 4.2.2 细胞总 RNA 的提取 | 第69-70页 |
| 4.2.3 cDNA 第一链的合成 | 第70页 |
| 4.2.4 real time RT-PCR | 第70-71页 |
| 4.2.5 总蛋白的提取 | 第71页 |
| 4.2.6 SDS-PAGE 电泳 | 第71-72页 |
| 4.2.7 电转移 | 第72页 |
| 4.2.8 Western 杂交 | 第72页 |
| 4.3 结果 | 第72-77页 |
| 4.4 讨论 | 第77-79页 |
| 结论 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-90页 |
| 作者在读期间发表的论文 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |