中文摘要 | 第2-3页 |
Abstract | 第3页 |
引言 | 第6-7页 |
第一章 实验材料 | 第7-11页 |
1 实验仪器 | 第7页 |
2 细胞株 | 第7页 |
3 主要试剂 | 第7-8页 |
4 溶液配制 | 第8-11页 |
4.1 细胞培养及增殖测定相关试剂 | 第8页 |
4.2 RT-PCR试剂所需 | 第8-9页 |
4.3 感受态细胞的制备 | 第9页 |
4.4 Western Blot试剂的配制 | 第9-10页 |
4.5 实验耗材及其它 | 第10-11页 |
第二章 试验方法 | 第11-22页 |
1.1 U251细胞的培养 | 第11页 |
1.2 提取RNA所用器皿与电泳槽的处理 | 第11页 |
1.3 总RNA的提取 | 第11-12页 |
1.4 总RNA的定量及纯度检测 | 第12页 |
1.5 cDNA的合成 | 第12页 |
1.6 Notch1 NICD基因全长扩增 | 第12-15页 |
1.6.1 Notch1 NICD上游片段的合成 | 第13-14页 |
1.6.2 Notch1 NICD下游片段的合成 | 第14页 |
1.6.3 Notch1 NICD全长片段的合成 | 第14-15页 |
1.7 PCR产物的回收 | 第15-16页 |
1.8 Notch1基因胞内段NICD与PGEMT-easy载体的连接 | 第16-17页 |
1.9 连接产物转化感受态细胞 | 第17页 |
2.0 单克隆菌落挑取 | 第17页 |
2.1 质粒提取 | 第17-18页 |
2.2 质粒酶切及测序 | 第18页 |
2.3 重组腺病毒的包装 | 第18-19页 |
2.4 重组腺病毒感染乳腺癌细胞MCF-7 | 第19页 |
2.5 Western Blot检测转染前后NICD蛋白水平变化 | 第19-20页 |
2.6 MTT法检测细胞增殖状况 | 第20页 |
2.7 实时荧光定量PCR检测 | 第20-22页 |
第三章 实验结果 | 第22-27页 |
1 聚合酶链式反应Notch1基因胞内段全长 | 第22页 |
2 酶切鉴定Notch1基因 | 第22-23页 |
3 上海生工测序Notch1基因胞内段功能区NICD | 第23-24页 |
4 MTT法检测细胞转染后细胞增殖结果 | 第24-25页 |
5 Western Blot蛋白检测结果 | 第25-26页 |
6 荧光定量PCR检测Notch1胞内段mRNA结果 | 第26-27页 |
第四章 讨论 | 第27-29页 |
第五章 结论 | 第29-30页 |
参考文献 | 第30-31页 |
文献综述 | 第31-39页 |
综述参考文献 | 第36-39页 |
攻读学位期间的研究成果 | 第39-40页 |
英文缩略词表(Abbreviations and acronyms) | 第40-41页 |
致谢 | 第41-42页 |