| 目录 | 第4-7页 |
| CONTENT | 第7-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 符号说明及缩写词 | 第14-16页 |
| 第一章 Cuevaene生物合成途径的研究 | 第16-52页 |
| 1.1 前言 | 第16-20页 |
| 1.1.1 Cuevaene概述 | 第16页 |
| 1.1.2 Streptomyces sp.LZ35菌株中cuevaene生物合成途径的分析及基因功能预测 | 第16-19页 |
| 1.1.3 本章实验开展思路 | 第19-20页 |
| 1.2. 实验材料 | 第20-26页 |
| 1.2.1 菌株与质粒 | 第20-21页 |
| 1.2.2 培养基 | 第21-22页 |
| 1.2.3 试剂 | 第22-25页 |
| 1.2.4 仪器设备 | 第25-26页 |
| 1.3 实验技术 | 第26-30页 |
| 1.3.1 化学转化 | 第26页 |
| 1.3.2 电转化 | 第26-27页 |
| 1.3.3 E.coli化转感受态细胞制备 | 第27页 |
| 1.3.4 E.coli电转感受态细胞制备 | 第27-28页 |
| 1.3.5 SDS-PAGE | 第28页 |
| 1.3.6 考马斯亮蓝染色胶内酶解蛋白 | 第28-29页 |
| 1.3.7 接合转移 | 第29页 |
| 1.3.8 LZ35基因组的提取 | 第29-30页 |
| 1.3.9 质粒小量抽提验证 | 第30页 |
| 1.3.10 碱法抽提质粒 | 第30页 |
| 1.4 实验方法 | 第30-42页 |
| 1.4.1 引物信息 | 第30-34页 |
| 1.4.2 Cuevaene基因簇中相关基因的敲除 | 第34-36页 |
| 1.4.3 LAL及SARP基因在LZ35中的过表达 | 第36-38页 |
| 1.4.4 突变株及过表达菌株的发酵和HPLC检测 | 第38-39页 |
| 1.4.5 LZ35△gdm/cuv 10：：Apr与LZ35△gdm/cuv 18：：Apr的回补实验 | 第39-40页 |
| 1.4.6 Cuv 10的功能验证及动力学研究 | 第40-42页 |
| 1.4.6.1 Cuv 10在E.coli中的异源表达 | 第40-41页 |
| 1.4.6.2 Cuv 10的体外活性检测 | 第41页 |
| 1.4.6.3 Cuv 10的动力学研究 | 第41-42页 |
| 1.5 实验结果与分析 | 第42-50页 |
| 1.5.1 发酵检测结果分析 | 第42-46页 |
| 1.5.2 Cuv 10的异源表达及活性检测 | 第46-48页 |
| 1.5.3 Cuv 10的动力学特征 | 第48-50页 |
| 1.6 总结与展望 | 第50-52页 |
| 第二章 Asm 43及Asm 44在Ansamitocin生物合成中的功能研究 | 第52-74页 |
| 2.1 前言 | 第52-59页 |
| 2.1.1 安莎霉素概述 | 第52-54页 |
| 2.1.2 起始单元AHBA的生物合成研究 | 第54-55页 |
| 2.1.3 Kanosamine生物合成的研究进展 | 第55-57页 |
| 2.1.4 本章实验开展思路 | 第57-59页 |
| 2.2 实验方法 | 第59-67页 |
| 2.2.1 引物信息 | 第59-60页 |
| 2.2.2 asm 43及asm 44在E.coli中的异源表达 | 第60-62页 |
| 2.2.2.1 重组质粒的构建 | 第60-61页 |
| 2.2.2.2 诱导表达条件的优化 | 第61-62页 |
| 2.2.3 Asm 43及Asm 44、RifK及Rif L相互作用研究 | 第62-64页 |
| 2.2.3.1 His-tag pull-down实验 | 第62-63页 |
| 2.2.3.2 GST-tag pull-down实验 | 第63-64页 |
| 2.2.4 Asm 43及Asm 44、RifK及Rif L的活性检测 | 第64-67页 |
| 2.2.4.1 体外反应的检测 | 第64-65页 |
| 2.2.4.2 体内反应的检测 | 第65-67页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第67-73页 |
| 2.3.1 最佳诱导表达条件的探索及分析 | 第67-69页 |
| 2.3.2 Tag pull-down实验的结果分析 | 第69-71页 |
| 2.3.3 活性检测的结果分析 | 第71-73页 |
| 2.4 总结与展望 | 第73-74页 |
| 附录Ⅰ Streptomyces sp.LZ35中启动子的启动强度检测 | 第74-80页 |
| 附录Ⅱ 以PCR-targeting为基础的基因敲除原理示意图 | 第80-81页 |
| 附录Ⅲ 相关载体的图谱 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第90页 |
