| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 第一篇 文献综述 | 第13-29页 |
| 第一章 无乳链球菌致病机制研究进展 | 第13-29页 |
| 1 无乳链球菌的致病性 | 第13-15页 |
| 1.1 对人的致病性 | 第13-14页 |
| 1.2 对奶牛的致病性 | 第14页 |
| 1.3 对水产动物的致病性 | 第14-15页 |
| 2 毒力因子及其致病作用 | 第15-19页 |
| 2.1 GBS表面蛋白 | 第15-17页 |
| 2.2 β-溶血素 | 第17-18页 |
| 2.3 透明质酸酶 | 第18页 |
| 2.4 脂磷壁酸 | 第18-19页 |
| 3 无乳链球菌与宿主的互作机制 | 第19-20页 |
| 3.1 无乳链球菌与宿主细胞互作 | 第19-20页 |
| 3.2 无乳链球菌感染动物模型的建立 | 第20页 |
| 4 小结 | 第20-21页 |
| 参考文献 | 第21-29页 |
| 第二篇 实验研究 | 第29-81页 |
| 第二章 鱼源无乳链球菌小鼠血脑屏障开放评估模型的建立 | 第29-39页 |
| 1 材料与方法 | 第30-31页 |
| 1.1 菌株及实验动物 | 第30页 |
| 1.2 仪器和试剂 | 第30页 |
| 1.3 大肠杆菌M5的筛选 | 第30页 |
| 1.4 大肠杆菌M5对小鼠LD50的测定 | 第30-31页 |
| 1.5 大肠杆菌M5在小鼠血液中的代谢速率测定 | 第31页 |
| 1.6 大肠杆菌M5对BBB开放程度的指示作用测定 | 第31页 |
| 2 结果 | 第31-34页 |
| 2.1 大肠杆菌M5的筛选 | 第31-32页 |
| 2.2 大肠杆菌M5对小鼠LD50 | 第32页 |
| 2.3 大肠杆菌M5在小鼠血液中的代谢速率测定 | 第32-33页 |
| 2.4 M5对小鼠BBB开放程度的指示作用 | 第33-34页 |
| 3 讨论 | 第34-36页 |
| 参考文献 | 第36-39页 |
| 第三章 无乳链球菌透明质酸酶的表达及其对小鼠的致病作用 | 第39-49页 |
| 1 材料与方法 | 第39-41页 |
| 1.1 菌株、质粒和实验动物 | 第40页 |
| 1.2 试剂 | 第40页 |
| 1.3 引物的设计与合成 | 第40页 |
| 1.4 hylB份基因的克隆及原核表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 1.5 重组蛋白的表达与纯化 | 第41页 |
| 1.6 重组蛋白的Western blot检测 | 第41页 |
| 1.7 重组蛋白活性检测 | 第41页 |
| 1.8 重组蛋白对小鼠攻毒试验 | 第41页 |
| 2 结果 | 第41-46页 |
| 2.1 hylB基因PCR扩增和重组质粒的双酶切 | 第42页 |
| 2.2 重组蛋白的表达及纯化 | 第42-43页 |
| 2.3 重组蛋白的Western blot检测 | 第43-44页 |
| 2.4 Hyl重组蛋白降解透明质酸的活性检测 | 第44页 |
| 2.5 重组蛋白注射后小鼠的临床表现 | 第44-45页 |
| 2.6 重组蛋白注射后小鼠的组织病理学变化 | 第45-46页 |
| 3 讨论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-49页 |
| 第四章 鱼源无乳链球菌cas9基因缺失株和互补株的构建 | 第49-63页 |
| 1 材料与方法 | 第49-55页 |
| 1.1 菌株、质粒与引物 | 第49-52页 |
| 1.2 仪器和试剂 | 第52页 |
| 1.3 cas9基因缺失载体的构建 | 第52-53页 |
| 1.4 cas9基因缺失株的构建 | 第53-54页 |
| 1.5 目的基因互补株的构建 | 第54页 |
| 1.6 缺失株和互补株的荧光定量PCR鉴定 | 第54页 |
| 1.7 遗传稳定性分析 | 第54-55页 |
| 2 结果 | 第55-58页 |
| 2.1 无乳链球菌cas9基因上下游臂的PCR扩增 | 第55页 |
| 2.2 基因缺失质粒的构建 | 第55-56页 |
| 2.3 基因互补质粒的构建 | 第56页 |
| 2.4 基因缺失株的PCR鉴定 | 第56-57页 |
| 2.5 荧光定量PCR分析cas9基因的表达 | 第57-58页 |
| 2.6 遗传稳定性分析 | 第58页 |
| 3 讨论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
| 第五章 鱼源无乳链球菌cas9基因缺失株生物学特性分析 | 第63-81页 |
| 1 材料与方法 | 第64-67页 |
| 1.1 菌株、细胞系和实验动物 | 第64页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第64页 |
| 1.3 特性分析 | 第64-67页 |
| 2 结果 | 第67-75页 |
| 2.1 生长曲线的测定 | 第67-68页 |
| 2.2 小鼠巨噬细胞的吞噬实验 | 第68-69页 |
| 2.3 小鼠脑微血管内皮细胞的黏附试验 | 第69-70页 |
| 2.4 斑马鱼LD_(50)的测定 | 第70-71页 |
| 2.5 巨噬细胞胞内存活试验 | 第71-72页 |
| 2.6 小鼠的存活时间比较 | 第72页 |
| 2.7 cas9基因缺失株中hylB基因表达水平的检测 | 第72-73页 |
| 2.8 cas9基因缺失株的Hyl活性检测 | 第73页 |
| 2.9 不同菌株和Hyl致小鼠血脑屏障BBB开放程度的检测 | 第73-75页 |
| 3 讨论 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-81页 |
| 全文总结 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
