| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 前言 | 第10-22页 |
| 1.1 甘薯 | 第10-11页 |
| 1.2 甘薯病毒病 | 第11-16页 |
| 1.2.1 甘薯病毒病的症状 | 第11-12页 |
| 1.2.2 甘薯病毒病的病原病毒种类 | 第12页 |
| 1.2.3 甘薯病毒病的传播 | 第12-13页 |
| 1.2.4 甘薯羽状斑驳病毒 | 第13-14页 |
| 1.2.5 甘薯褪绿矮化病毒 | 第14-16页 |
| 1.2.6 甘薯病毒病害 | 第16页 |
| 1.3 甘薯病毒病的检测方法 | 第16-21页 |
| 1.3.1 生物学鉴定法 | 第17页 |
| 1.3.2 血清学检测法 | 第17-18页 |
| 1.3.3 电子显微镜技术 | 第18-19页 |
| 1.3.4 分子生物学检测法 | 第19-21页 |
| 1.3.4.1 核酸分子杂交技术 | 第19页 |
| 1.3.4.2 聚合酶链式反应 | 第19-20页 |
| 1.3.4.3 小RNA深度测序 | 第20页 |
| 1.3.4.4 滚环扩增 | 第20-21页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-34页 |
| 2.1 材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 样品的来源和保存 | 第22页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第22页 |
| 2.1.3 菌株的保存 | 第22页 |
| 2.1.4 试剂和仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.5 培养基 | 第23页 |
| 2.1.6 寡聚核苷酸引物 | 第23页 |
| 2.2 方法 | 第23-34页 |
| 2.2.1 样品的采集 | 第23页 |
| 2.2.2 甘薯总RNA的提取 | 第23-25页 |
| 2.2.2.1 Trizol法提取 | 第23-24页 |
| 2.2.2.2 RNAprep Pure试剂盒法提取 | 第24-25页 |
| 2.2.2.3 RNA的纯度及浓度的检测 | 第25页 |
| 2.2.3 引物的设计与合成 | 第25-26页 |
| 2.2.4 反转录合成第一条链cDNA | 第26页 |
| 2.2.5 聚合酶链式反应(PCR) | 第26页 |
| 2.2.6 酶切反应 | 第26-27页 |
| 2.2.7 DNA片段回收 | 第27页 |
| 2.2.8 氯化铷法制备感受态细胞 | 第27-28页 |
| 2.2.9 连接反应 | 第28页 |
| 2.2.9.1 常规连接反应 | 第28页 |
| 2.2.9.2 原核表达重组质粒的构建 | 第28页 |
| 2.2.10 连接产物转化 | 第28-29页 |
| 2.2.11 质粒提取 | 第29-30页 |
| 2.2.12 蛋白的诱导表达 | 第30页 |
| 2.2.13 表达产物的可溶性分析 | 第30-31页 |
| 2.2.14 重组蛋白的纯化 | 第31页 |
| 2.2.15 植物总蛋白的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.16 间接ELISA | 第32页 |
| 2.2.17 Western Blot | 第32-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-66页 |
| 3.1 甘薯总RNA的提取 | 第34页 |
| 3.2 甘薯样品的RT-PCR检测 | 第34-35页 |
| 3.3 甘薯病毒病的症状 | 第35-36页 |
| 3.4 SPFMV广西分离物的CP基因 | 第36-47页 |
| 3.4.1 SPFMV广西分离物CP基因的克隆 | 第36-37页 |
| 3.4.2 SPFMV广西分离物CP基因的序列分析 | 第37-47页 |
| 3.5 SPCSV广西分离物CP基因 | 第47-57页 |
| 3.5.1 SPCSV广西分离物CP基因的克隆 | 第47页 |
| 3.5.2 SPCSV广西分离物CP基因的序列分析 | 第47-57页 |
| 3.6 SPCSV CP基因的原核表达纯化、抗血清的制备 | 第57-66页 |
| 3.6.1 SPCSV CP基因的克隆 | 第57-58页 |
| 3.6.2 构建SPCSV-CP表达载体 | 第58-59页 |
| 3.6.3 SPCSV-CP重组蛋白的原核表达 | 第59-61页 |
| 3.6.4 表达产物的可溶性分析 | 第61-62页 |
| 3.6.5 重组蛋白的纯化 | 第62-63页 |
| 3.6.6 表达产物的质量检测 | 第63-64页 |
| 3.6.7 抗体的制备 | 第64页 |
| 3.6.8 SPCSV CP抗体的效价测定 | 第64页 |
| 3.6.9 抗体的特异性检测 | 第64-66页 |
| 4 讨论与结论 | 第66-70页 |
| 4.1 讨论 | 第66-68页 |
| 4.1.1 总RNA的提取 | 第66页 |
| 4.1.2 甘薯病毒病 | 第66页 |
| 4.1.3 SPFMV的遗传多样性的分析 | 第66-67页 |
| 4.1.4 SPCSV的遗传多样性的分析 | 第67页 |
| 4.1.5 抗原的制备方法比较 | 第67-68页 |
| 4.1.6 关于CP基因的原核诱导表达 | 第68页 |
| 4.2 结论 | 第68-70页 |
| 4.2.1 甘薯病毒病症状 | 第68-69页 |
| 4.2.2 SPFMV的CP序列分析 | 第69页 |
| 4.2.3 SPCSV的CP序列分析 | 第69页 |
| 4.2.4 SPCSV的抗体制备 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 附录A 实验中常用溶液 | 第76-77页 |
| 附录B 攻读学位期间所发表论文目录 | 第77页 |
