| 图表索引 | 第1-10页 |
| 英文縮略词 | 第10-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 文献综述 | 第15-23页 |
| 前言 | 第23-26页 |
| 材料与方法 | 第26-40页 |
| 一、实验材料 | 第26-32页 |
| 1.细胞 | 第26页 |
| 2.动物 | 第26-27页 |
| 3.主要试剂 | 第27-30页 |
| ·抗体 | 第27-28页 |
| ·常用试剂及材料 | 第28-30页 |
| 4.主要仪器与设备 | 第30页 |
| 5.计算机分析软件 | 第30-31页 |
| 6.主要自配试剂及其配方 | 第31-32页 |
| 二、实验方法 | 第32-40页 |
| 1.肝癌细胞的培养 | 第32页 |
| ·人肝癌细胞系Bel7402-V3的传代与培养 | 第32页 |
| ·人肝癌细胞系HepG2的传代与培养 | 第32页 |
| 2.肝癌干细胞相关亚群的无血清悬浮培养(sphere培养) | 第32页 |
| 3.杂交瘤细胞的培养 | 第32页 |
| 4.PKH26染色 | 第32-33页 |
| 5.流式细胞术分析或分选 | 第33页 |
| 6.双色流式荧光分析或分选 | 第33-34页 |
| 7.细胞免疫荧光 | 第34页 |
| 8.双色细胞免疫荧光 | 第34页 |
| 9.原位细胞免疫荧光 | 第34-35页 |
| 10.免疫组织化学检测 | 第35页 |
| 11.肝癌干细胞体外生物学特征的分析 | 第35-37页 |
| ·自我更新能力检测 | 第35页 |
| ·增殖能力检测 | 第35-36页 |
| ·耐药能力检测 | 第36页 |
| ·侵袭能力检测 | 第36-37页 |
| 12.肝癌干细胞体内致瘤能力的分析 | 第37页 |
| 13.抗肝癌干细胞单抗对肝癌干细胞生物学功能影响的分析 | 第37-38页 |
| ·抑制自我更新能力的检测 | 第37页 |
| ·抑制侵袭能力的检测 | 第37-38页 |
| ·抑制迁移能力的检测 | 第38页 |
| 14.单抗靶向肝癌干细胞治疗肝癌的体内实验研究 | 第38页 |
| 15.疏水层析纯化IgM抗体 | 第38-39页 |
| 16.统计学分析 | 第39-40页 |
| 第一部分 人肝癌干细胞的分离与鉴定 | 第40-65页 |
| 一、前言 | 第40-42页 |
| 二、实验结果 | 第42-61页 |
| (一) 人肝癌细胞系Bel7402-V3中肿瘤干细胞的分离与鉴定 | 第42-54页 |
| 1、PKH26染色检测肝癌干细胞 | 第42-43页 |
| 2、流式荧光检测sphere细胞中肝癌干细胞的相关标志物 | 第43页 |
| 3、双色流式荧光检测ESA~+CD44~+细胞在sphere细胞中的富集 | 第43-44页 |
| 4、ESA~+CD44~+细胞的自我更新能力分析 | 第44-46页 |
| 5、ESA~+CD44~+细胞的侵袭能力分析 | 第46-47页 |
| 6、ESA~+CD44~+细胞的体内致瘤能力分析 | 第47-48页 |
| 7、PKH26染色检测球形生长的肿瘤干细胞ESA的表达 | 第48-49页 |
| 8、ESA~+细胞的自我更新能力分析 | 第49-50页 |
| 9、ESA~+细胞的耐药能力分析 | 第50-52页 |
| 10、ESA~+细胞的侵袭能力分析 | 第52-53页 |
| 11、ESA~+细胞的致瘤能力分析 | 第53-54页 |
| (二) 人肝癌细胞系HepG2肿瘤干细胞的分离鉴定 | 第54-61页 |
| 1、sphere培养及PKH26染色检测肝癌千细胞 | 第54页 |
| 2、流式荧光检测sphere细胞中肝癌干细胞的相关标志物 | 第54-55页 |
| 3、细胞免疫荧光检测CD117~+细胞在sphere细胞中的富集 | 第55-56页 |
| 4、CD117~+细胞的自我更新能力的检测分析 | 第56-57页 |
| 5、CD117~+细胞体外增殖能力检测 | 第57-58页 |
| 6、CD117~+细胞的耐药能力检测 | 第58-59页 |
| 7、CD117~+细胞在SCID小鼠体内的成瘤能力分析 | 第59-61页 |
| 三、讨论 | 第61-64页 |
| 四、小结 | 第64-65页 |
| 第二部分 抗肝癌干细胞单抗的研究 | 第65-93页 |
| 一、前言 | 第65-69页 |
| 二、实验结果 | 第69-88页 |
| (一) 抗人肝癌干细胞单抗15D2的研究 | 第69-81页 |
| 1、PKH26检测15D2单抗识别肝癌干细胞 | 第69-70页 |
| 2、流式荧光检测15D2~+细胞在sphere细胞中的富集 | 第70页 |
| 3、双色免疫荧光检测15D2识别ESA~+的肝癌干细胞 | 第70-71页 |
| 4、双色流式荧光检测15D2和ESA双阳性细胞的比例 | 第71-72页 |
| 5、15D2~+细胞的自我更新能力检测 | 第72-73页 |
| 6、15D2~+细胞的耐药性分析 | 第73-74页 |
| 7、15D2~+细胞的致瘤能力分析 | 第74-75页 |
| 8、15D2单克隆抗体的纯化 | 第75页 |
| 9、15D2单抗抑制肝癌干细胞增殖能力的比较 | 第75-76页 |
| 10、15D2单抗抑制肝癌干细胞的侵袭能力 | 第76-77页 |
| 11、15D2单抗抑制肝癌干细胞的迁移能力 | 第77-78页 |
| 12、15D2单抗靶向肝癌干细胞治疗肝癌的体内实验研究 | 第78-81页 |
| (二) 抗人肝癌干细胞单抗15B7的研究 | 第81-88页 |
| 1、PKH26检测15B7单抗识别肝癌干细胞 | 第81页 |
| 2、流式荧光检测15B7~+细胞在sphere细胞中的富集 | 第81-82页 |
| 3、双色免疫荧光检测15B7识别ESA~+的肝癌干细胞 | 第82-83页 |
| 4、流式双色细胞荧光检测15B7和ESA双阳性细胞的比例 | 第83页 |
| 5、15B7~+细胞的自我更新能力检测 | 第83-84页 |
| 6、15B7~+细胞的侵袭能力分析 | 第84-85页 |
| 7、15B7单抗抑制sphere细胞的增殖能力 | 第85-86页 |
| 8、15B7单抗抑制肝癌干细胞的自我更新能力 | 第86页 |
| 9、15B7单抗抑制肝癌干细胞的侵袭能力 | 第86-88页 |
| 三、讨论 | 第88-91页 |
| 四、小结 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第100页 |
