| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-20页 |
| 1.1 重组蛋白表达系统 | 第10-12页 |
| 1.1.1 原核表达系统 | 第10-11页 |
| 1.1.2 真核表达系统 | 第11-12页 |
| 1.1.3 无细胞表达系统 | 第12页 |
| 1.2 枯草芽孢杆菌表达系统研究 | 第12-15页 |
| 1.2.1 基因敲除策略 | 第14-15页 |
| 1.3 质粒转化方法研究 | 第15-18页 |
| 1.3.1 常用转化方法 | 第15-16页 |
| 1.3.2 显微注射法 | 第16-17页 |
| 1.3.2.1 显微注射法简介 | 第16-17页 |
| 1.3.2.2 显微注射法主要优缺点 | 第17页 |
| 1.3.3 枯草芽孢杆菌常用载体 | 第17-18页 |
| 1.3.3.1 可复制质粒 | 第17页 |
| 1.3.3.2 噬菌体 | 第17页 |
| 1.3.3.3 整合型质粒 | 第17-18页 |
| 1.4 本实验目的意义和主要技术路线 | 第18-20页 |
| 1.4.1 目的意义 | 第18-19页 |
| 1.4.2 主要技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-35页 |
| 2.1 原核表达宿主的筛选 | 第20-26页 |
| 2.1.1 材料与仪器 | 第20-22页 |
| 2.1.1.1 菌株 | 第20页 |
| 2.1.1.2 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.1.3 常用溶液剂缓冲液 | 第20-21页 |
| 2.1.1.4 培养基 | 第21页 |
| 2.1.1.5 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.2 方法与步骤 | 第22-26页 |
| 2.1.2.1 牛奶培养基初步筛选不产蛋白酶的菌株 | 第22页 |
| 2.1.2.2 福林酚法测定蛋白酶酶活 | 第22-25页 |
| 2.1.2.3 革兰氏染色初步观察菌株 | 第25-26页 |
| 2.2 枯草芽孢杆菌HS-A38中蛋白酶基因序列分析及克隆 | 第26-30页 |
| 2.2.1 材料与仪器 | 第26-27页 |
| 2.2.1.1 菌株及质粒 | 第26页 |
| 2.2.1.2 主要试剂 | 第26页 |
| 2.2.1.3 主要溶液和缓冲液 | 第26页 |
| 2.2.1.4 培养基 | 第26页 |
| 2.2.1.5 主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.2.1.6 主要软件及数据库 | 第27页 |
| 2.2.2 方法与步骤 | 第27-30页 |
| 2.2.2.1 枯草芽孢杆菌基因组DNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.2.2 引物的设计 | 第28-29页 |
| 2.2.2.3 枯草芽孢杆菌中性蛋白酶的PCR扩增 | 第29-30页 |
| 2.3 | 第30-35页 |
| 2.3.1 电转化导入质粒 | 第30-31页 |
| 2.3.1.1 菌株与质粒 | 第30页 |
| 2.3.1.2 主要试剂 | 第30页 |
| 2.3.1.3 特异引物 | 第30-31页 |
| 2.3.1.4 主要溶液和缓冲液 | 第31页 |
| 2.3.1.5 培养基 | 第31页 |
| 2.3.1.6 主要仪器 | 第31页 |
| 2.3.2 方法与步骤 | 第31-35页 |
| 2.3.2.1 电转化感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| 2.3.2.2 电转化 | 第32-33页 |
| 2.3.2.3 菌落PCR | 第33-34页 |
| 2.3.2.4 质粒的提取 | 第34-35页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第35-44页 |
| 3.1 原核表达宿主的筛选 | 第35-37页 |
| 3.1.1 菌株抑菌活性实验结果 | 第35页 |
| 3.1.2 牛奶培养基初步筛选不产蛋白酶的菌株 | 第35页 |
| 3.1.3 革兰氏染色结果 | 第35-36页 |
| 3.1.4 蛋白酶活力测定结果 | 第36-37页 |
| 3.2 枯草芽孢杆菌HS-A38中蛋白酶基因序列分析及克隆 | 第37-40页 |
| 3.2.1 枯草芽孢杆菌HS-A38中蛋白酶基因序列分析 | 第37-39页 |
| 3.2.2 枯草芽孢杆菌中性蛋白酶的PCR扩增 | 第39-40页 |
| 3.3 电转化 | 第40-44页 |
| 3.3.1 电转化导入质粒pHT-43-结果 | 第40页 |
| 3.3.2 枯草芽孢杆菌HS-A38菌株电转化条件的优化 | 第40-44页 |
| 3.3.2.1 不同电压对转化效率的影响 | 第40-41页 |
| 3.3.2.2 转化产物含量对转化效率的影响 | 第41-42页 |
| 3.3.2.3 感受态与质粒共培养时间对转化效率的影响 | 第42-43页 |
| 3.3.2.4 菌落PCR检测 | 第43-44页 |
| 第四章 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 致谢 | 第49页 |
