| 中文摘要 | 第3-6页 |
| 英文摘要 | 第6-8页 |
| 1、前言 | 第13-16页 |
| 2、材料及方法 | 第16-32页 |
| 2.1、研究对象 | 第16-17页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第16页 |
| 2.1.2 实验细胞 | 第16页 |
| 2.1.3 临床标本收集与分组 | 第16-17页 |
| 2.2、实验材料 | 第17-22页 |
| 2.2.1 主要仪器及耗材 | 第17-18页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第18-19页 |
| 2.2.3 主要试剂的配制 | 第19-22页 |
| 2.2.3.1 电泳缓冲液 | 第19-20页 |
| 2.2.3.1.1 50×TAE缓冲液的配制 | 第19页 |
| 2.2.3.1.2 10×MOPS缓冲液 | 第19-20页 |
| 2.2.3.2 琼脂糖凝胶 | 第20页 |
| 2.2.3.2.1 甲醛变性胶的配制 | 第20页 |
| 2.2.3.2.2 1%琼脂糖凝胶的配制 | 第20页 |
| 2.2.3.3 D-Hank’s | 第20-21页 |
| 2.2.3.4 4%中性甲醛 | 第21页 |
| 2.2.3.5 3%戊巴比妥 | 第21页 |
| 2.2.3.6 0.01mol/L的PBS | 第21页 |
| 2.2.3.7 苏木素复染液 | 第21-22页 |
| 2.3、实验方法 | 第22-31页 |
| 2.3.1 动物实验 | 第22-28页 |
| 2.3.1.1 动物模型建立 | 第22页 |
| 2.3.1.2 大鼠血、尿生化及组织标本采集 | 第22页 |
| 2.3.1.3 病理组织形态变化 | 第22-24页 |
| 2.3.1.3.1 石蜡切片制备 | 第22-23页 |
| 2.3.1.3.2 苏木素-伊红（HE）染色 | 第23页 |
| 2.3.1.3.3 免疫组化检测 | 第23-24页 |
| 2.3.1.4 肾脏组织RNA提取 | 第24-27页 |
| 2.3.1.4.1 研钵、研棒准备 | 第24页 |
| 2.3.1.4.2 组织匀浆 | 第24页 |
| 2.3.1.4.3 组织RNA提取 | 第24页 |
| 2.3.1.4.4 总RNA浓度检测 | 第24-25页 |
| 2.3.1.4.5 总RNA纯度检测（RNA电泳） | 第25页 |
| 2.3.1.4.6 RT-PCR合成cDNA逆转录合成体系和条件 | 第25-26页 |
| 2.3.1.4.7 目的基因与内参扩增片段鉴定 | 第26-27页 |
| 2.3.1.5 传统生化指标检测 | 第27-28页 |
| 2.3.2 人肾小管上皮细胞培养 | 第28-30页 |
| 2.3.2.1 细胞培养及实验分组 | 第28页 |
| 2.3.2.2 细胞收集及上清标本采集 | 第28页 |
| 2.3.2.3 人肾小管上皮细胞RNA提取 | 第28页 |
| 2.3.2.4 实时荧光定量PCR检测mRNA | 第28-30页 |
| 2.3.2.4.1 引物序列设计与合成 | 第29-30页 |
| 2.3.2.4.1.1 大鼠肾脏RNA引物 | 第29页 |
| 2.3.2.4.1.2 人肾小管上皮细胞RNA引物 | 第29-30页 |
| 2.3.2.4.2 荧光定量PCR体系及条件 | 第30页 |
| 2.3.2.4.3 相对定量计算方法 | 第30页 |
| 2.3.3 临床标本的收集与检测 | 第30-31页 |
| 2.3.3.1 传统血清生化指标的检测 | 第30-31页 |
| 2.3.3.2 ELISA法检测NGAL、KIM-1 | 第31页 |
| 2.4、统计学处理 | 第31-32页 |
| 3、结果 | 第32-46页 |
| 3.1 动物模型相关实验结果 | 第32-41页 |
| 3.1.1 血清肌酐、尿素以及胱抑素C指标检测 | 第32页 |
| 3.1.2 24h尿微量白蛋白指标检测 | 第32-33页 |
| 3.1.3 病理切片HE染色结果 | 第33-34页 |
| 3.1.4 免疫组织化学结果 | 第34-37页 |
| 3.1.5 各模型组大鼠肾脏组织基因表达情况 | 第37-40页 |
| 3.1.5.1 总RNA纯度初步鉴定 | 第38页 |
| 3.1.5.2 Lcn2、HAVCR1及GAPDH各引物扩增产物电泳图 | 第38-39页 |
| 3.1.5.3 实时荧光相对定量结果 | 第39-40页 |
| 3.1.6 大鼠血液标本中NGAL、KIM-1 检测 | 第40页 |
| 3.1.7 大鼠尿液标本中NGAL、KIM-1 检测 | 第40-41页 |
| 3.2 细胞损坏模型相关实验结果 | 第41-44页 |
| 3.2.1 细胞培养上清液中NGAL、KIM-1 检测 | 第41-42页 |
| 3.2.2 不同时间点药物处理人肾小管上皮细胞基因表达情况 | 第42-44页 |
| 3.2.2.1 总RNA纯度初步鉴定 | 第42页 |
| 3.2.2.2 Lcn2、HAVCR1及GAPDH各引物扩增产物电泳图 | 第42-43页 |
| 3.2.2.3 实时荧光相对定量结果 | 第43-44页 |
| 3.3 临床标本初步实验结果 | 第44-46页 |
| 3.3.1 临床患者组间基础情况比较 | 第44页 |
| 3.3.2 临床血液标本肾功能检测 | 第44-45页 |
| 3.3.3 临床血液标本NGAL、KIM-1 的检测 | 第45页 |
| 3.3.4 临床尿液标本NGAL、KIM-1 的检测 | 第45-46页 |
| 4、讨论 | 第46-51页 |
| 5、结论 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 综述 | 第61-71页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 英文缩写对照表 | 第71-73页 |
| 实验动物设施使用及质量合格证 | 第73-75页 |
| 读研期间发表的论文及参与的课题 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77-79页 |
