| 致谢 | 第4-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-17页 |
| 1.1 玉米发育与表观遗传学干预 | 第9-14页 |
| 1.1.1 研究玉米发育的意义 | 第9页 |
| 1.1.2 表观遗传学研究 | 第9-10页 |
| 1.1.3 表观遗传修饰植物发育的分子机制 | 第10-14页 |
| 1.1.3.1 DNA甲基化 | 第10-12页 |
| 1.1.3.2 非编码RNA调控 | 第12-13页 |
| 1.1.3.3 组蛋白的共价修饰与染色质重塑 | 第13-14页 |
| 1.2 PcG蛋白复合体与植物发育调控 | 第14-17页 |
| 1.2.1 PcG蛋白复合体调控植物发育的分子机制 | 第14-17页 |
| 1.2.1.1 PcG蛋白复合体的组成 | 第14页 |
| 1.2.1.2 PcG复合体的作用机制 | 第14-15页 |
| 1.2.1.3 玉米发育关联的印迹基因 | 第15-17页 |
| 2 引言 | 第17页 |
| 3 材料与方法 | 第17-30页 |
| 3.1 供试材料 | 第17页 |
| 3.2 实验仪器与设备 | 第17-18页 |
| 3.3 试剂 | 第18-19页 |
| 3.4 试验方法 | 第19-30页 |
| 3.4.1 预备耗材处理方法 | 第19页 |
| 3.4.2 部分试剂配制方法 | 第19-20页 |
| 3.4.3 常用培养基 | 第20页 |
| 3.4.4 常用分子生物学试验方法 | 第20-21页 |
| 3.4.4.1 质粒DNA的提取(参照AxyPrep质粒DNA小量试剂盒) | 第20-21页 |
| 3.4.4.2 琼脂糖凝胶回收(参照Axygen DNA凝胶回收试剂盒) | 第21页 |
| 3.4.5 玉米水培体系的建立 | 第21-22页 |
| 3.4.5.1 水培体系的配置方法 | 第21页 |
| 3.4.5.2 玉米水培及取样方法 | 第21-22页 |
| 3.4.6 玉米Polycomb家族基因的克隆 | 第22-25页 |
| 3.4.6.1 四种Polycomb家族基因的确定 | 第22页 |
| 3.4.6.2 玉米不同时期不同组织部位总RNA提取及纯化 | 第22-24页 |
| 3.4.6.3 玉米不同时期不同组织部位总RNA的反转录 | 第24页 |
| 3.4.6.4 PCR扩增 | 第24-25页 |
| 3.4.6.5 DNA琼脂糖凝胶电泳检测 | 第25页 |
| 3.4.6.6 实时荧光定量PCR(Real-time PCR) | 第25页 |
| 3.4.7 玉米Polycomb家族基因克隆载体的构建 | 第25-27页 |
| 3.4.7.1 目的基因片段与pMD19-T Vector的连接 | 第25-26页 |
| 3.4.7.2 连接产物的转化及感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| 3.4.7.3 阳性克隆的筛选 | 第27页 |
| 3.4.7.4 重组克隆质粒DNA的提取 | 第27页 |
| 3.4.7.5 重组克隆质粒的双酶切 | 第27页 |
| 3.4.7.6 序列测定 | 第27页 |
| 3.4.7.7 生物信息学分析 | 第27页 |
| 3.4.8 玉米Polycomb家族基因表达载体的构建 | 第27-29页 |
| 3.4.8.1 重组克隆质粒和表达载体质粒的双酶切 | 第27-28页 |
| 3.4.8.2 目的片段的回收纯化 | 第28页 |
| 3.4.8.3 目的片段和表达载体的连接 | 第28-29页 |
| 3.4.8.4 转化 | 第29页 |
| 3.4.8.5 阳性克隆的筛选 | 第29页 |
| 3.4.8.6 重组表达质粒DNA的提取 | 第29页 |
| 3.4.8.7 重组表达质粒的双酶切检测 | 第29页 |
| 3.4.9 重组质粒的蛋白质表达 | 第29页 |
| 3.4.9.1 重组质粒在大肠杆菌BL21中的表达 | 第29页 |
| 3.4.9.2 表达产物的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测 | 第29页 |
| 3.4.9.3 确定蛋白表达最佳条件 | 第29页 |
| 3.4.9.4 确定蛋白表达形式 | 第29页 |
| 3.4.10 抗体制备 | 第29-30页 |
| 3.4.10.1 抗原制备 | 第29-30页 |
| 3.4.10.2 抗体制备 | 第30页 |
| 3.4.11 Western杂交 | 第30页 |
| 4 结果与分析 | 第30-42页 |
| 4.1 PcG蛋白家族基因的克隆及生物信息学分析 | 第30-39页 |
| 4.1.1 玉米不同时期不同组织部位总RNA的提取 | 第30-31页 |
| 4.1.2 玉米不同时期不同组织部位总RNA的RT-PCR扩增 | 第31页 |
| 4.1.3 PcG蛋白家族基因在籽粒中的表达分析 | 第31-32页 |
| 4.1.4 重组克隆质粒的鉴定 | 第32-33页 |
| 4.1.4.1 重组克隆质粒的阳性筛选 | 第32-33页 |
| 4.1.4.2 重组克隆载体双酶切检测 | 第33页 |
| 4.1.5 目的基因的测序结果及生物信息学分析 | 第33-37页 |
| 4.1.5.1 测序结果 | 第33-35页 |
| 4.1.5.2 生物信息学分析 | 第35-37页 |
| 4.1.6 重组表达质粒的鉴定 | 第37-39页 |
| 4.1.6.1 重组表达载体的阳性筛选 | 第37-38页 |
| 4.1.6.2 重组表达载体双酶切检测 | 第38-39页 |
| 4.2 PcG蛋白家族基因的原核表达研究 | 第39-41页 |
| 4.2.1 重组表达载体在大肠杆菌中的表达 | 第39-40页 |
| 4.2.2 重组蛋白最佳表达时间的确定 | 第40页 |
| 4.2.3 重组蛋白表达形式的确定 | 第40-41页 |
| 4.3 抗原制备 | 第41页 |
| 4.4 Western分析 | 第41-42页 |
| 5 结论与讨论 | 第42-45页 |
| 5.1 PcG蛋白家族基因与胚乳发育 | 第42-43页 |
| 5.2 PcG家族基因的功能与分子生物学分析 | 第43页 |
| 5.3 PcG家族基因的原核表达与抗体制备 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-51页 |
| ABSTRACT | 第51-52页 |
| 附录一 硕士期间待发表的论文 | 第53页 |
