| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第一章 绪论 | 第12-21页 |
| 1.1 卵巢癌简介 | 第12-13页 |
| 1.1.1 卵巢癌的治疗方法 | 第12-13页 |
| 1.1.1.1 标准治疗与耐药性 | 第12页 |
| 1.1.1.2 靶向治疗 | 第12-13页 |
| 1.2 PARD6A与卵巢癌的联系 | 第13-20页 |
| 1.2.1 PARD6A简介 | 第13-15页 |
| 1.2.1.1 PAR6家族成员 | 第13-14页 |
| 1.2.1.2 PAR6的结构和生理功能 | 第14-15页 |
| 1.2.2 PAR6与癌症的关系及参与的信号通路 | 第15-20页 |
| 1.2.2.1 PAR6在已知肿瘤中的作用 | 第19-20页 |
| 1.2.2.2 PARD6A与卵巢癌 | 第20页 |
| 1.3 本课题的研究内容和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 PARD6A在卵巢癌中的相关性评估 | 第21-31页 |
| 2.1 实验仪器、材料与试剂 | 第21-23页 |
| 2.1.1 仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.2 材料与试剂 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-28页 |
| 2.2.1 缓冲液的配制 | 第23-25页 |
| 2.2.2 Western blot检验PARD6A在不同卵巢癌细胞株中的表达量 | 第25-26页 |
| 2.2.3 IHC检验PARD6A在卵巢癌临床组织样本中的表达量 | 第26-28页 |
| 2.3 实验结果 | 第28-30页 |
| 2.3.1 PARD6A在卵巢癌细胞株A2780、SKOV3中表达异常 | 第28页 |
| 2.3.2 PARD6A在卵巢癌临床肿瘤样本中高表达 | 第28-30页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第30-31页 |
| 第三章 沉默PARD6A对卵巢癌细胞株的作用 | 第31-50页 |
| 3.1 实验仪器、材料与试剂 | 第31-33页 |
| 3.1.1 仪器 | 第31页 |
| 3.1.2 材料与试剂 | 第31-33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-41页 |
| 3.2.1 试剂配制 | 第33页 |
| 3.2.2 western blot检测siPARD6A敲除效率 | 第33-34页 |
| 3.2.2.1 siRNA序列设计与合成 | 第34页 |
| 3.2.2.2 siRNA逆转染实验 | 第34页 |
| 3.2.3 qRT-PCR检测si PARD6A敲除效率 | 第34-36页 |
| 3.2.4 MTT法检测si PARD6A对卵巢癌细胞增殖的影响 | 第36-37页 |
| 3.2.5 siPARD6A对细胞锚定非依赖性生长的影响 | 第37-38页 |
| 3.2.5.1 siRNA逆转染实验 | 第37页 |
| 3.2.5.2 琼脂糖凝胶实验 | 第37-38页 |
| 3.2.6 siPARD6A对癌细胞迁移侵润的影响 | 第38-39页 |
| 3.2.6.1 siRNA逆转染实验 | 第38页 |
| 3.2.6.2 细胞迁移实验 | 第38-39页 |
| 3.2.6.3 细胞侵润实验 | 第39页 |
| 3.2.7 Western blot检测PARD6A对迁移侵润过程的影响 | 第39-40页 |
| 3.2.8 siPARD6A对癌细胞吸附能力的影响 | 第40页 |
| 3.2.9 siPARD6A对癌细胞极性的影响 | 第40-41页 |
| 3.3 实验结果 | 第41-48页 |
| 3.3.1 沉默PARD6A对卵巢癌细胞的增殖无影响 | 第41-43页 |
| 3.3.2 沉默PARD6A对卵巢癌细胞锚定非依赖性生长无影响 | 第43-44页 |
| 3.3.3 沉默PARD6A能抑制卵巢癌细胞株的迁移和侵润 | 第44-45页 |
| 3.3.4 Western blot检测siPARD6A抑制迁移侵润过程 | 第45-47页 |
| 3.3.5 沉默PARD6A减弱卵巢癌细胞吸附能力 | 第47页 |
| 3.3.6 沉默PARD6A引起极性蛋白的变化 | 第47-48页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第48-50页 |
| 第四章 PARD6A过量表达对卵巢癌细胞株的影响 | 第50-65页 |
| 4.1 实验仪器、材料与试剂 | 第50-52页 |
| 4.1.1 仪器 | 第50-51页 |
| 4.1.2 材料与试剂 | 第51-52页 |
| 4.2 实验方法 | 第52-59页 |
| 4.2.1 试剂配制 | 第52-53页 |
| 4.2.2 目的基因PARD6A的获取 | 第53-55页 |
| 4.2.2.1 引物设计 | 第53-54页 |
| 4.2.2.2 PCR获得目的基因 | 第54页 |
| 4.2.2.3 PCR产物的回收 | 第54-55页 |
| 4.2.3 表达载体pCDH-PARD6A-T2A-Puro的构建 | 第55-56页 |
| 4.2.3.1 双酶切载体和PCR产物 | 第55页 |
| 4.2.3.2 载体和PCR产物酶切产物胶回收 | 第55页 |
| 4.2.3.3 连接酶切产物 | 第55-56页 |
| 4.2.3.4 连接产物转入DH5α感受态 | 第56页 |
| 4.2.3.5 提取质粒 | 第56页 |
| 4.2.4 克隆鉴定 | 第56-57页 |
| 4.2.4.1 酶切验证 | 第56-57页 |
| 4.2.4.2 测序验证 | 第57页 |
| 4.2.5 PARD6A过量表达对细胞增殖的影响 | 第57-58页 |
| 4.2.5.1 细胞慢病毒的制备 | 第57页 |
| 4.2.5.2 病毒转染细胞 | 第57-58页 |
| 4.2.5.3 Western blot检测PARD6A过表达效率 | 第58页 |
| 4.2.5.4 PARD6A过表达后对增殖的影响 | 第58页 |
| 4.2.6 PARD6A过量表达对细胞锚定非依赖性生长的影响 | 第58页 |
| 4.2.7 PARD6A与intergrin β1-PI3K信号通路的研究 | 第58页 |
| 4.2.8 PARD6A过量表达对细胞迁移侵润的影响 | 第58-59页 |
| 4.3 实验结果 | 第59-63页 |
| 4.3.1 pCDH-PARD6A-T2A-Puro表达载体的构建 | 第59页 |
| 4.3.2 PARD6A在卵巢癌细胞株SKOV3的过量表达 | 第59-60页 |
| 4.3.3 PARD6A过量表达对卵巢癌细胞增殖无影响 | 第60-61页 |
| 4.3.4 PARD6A过量表达促进卵巢癌细胞锚定非依赖性生长 | 第61页 |
| 4.3.5 过量表达PARD6A促进锚定非依赖性生长，很可能是通过intergrin β1 的信号通路 | 第61-62页 |
| 4.3.6 PARD6A过量表达促进卵巢癌细胞的迁移侵润 | 第62-63页 |
| 4.4 讨论与小结 | 第63-65页 |
| 第五章 SHRNA的构建与动物模型建立 | 第65-79页 |
| 5.1 实验仪器、材料与试剂 | 第65-66页 |
| 5.1.1 仪器 | 第65页 |
| 5.1.2 材料与试剂 | 第65-66页 |
| 5.2 实验方法 | 第66-70页 |
| 5.2.1 试剂配制 | 第66页 |
| 5.2.2 PARD6A shRNA的构建 | 第66-68页 |
| 5.2.2.1 细胞慢病毒的制备 | 第68页 |
| 5.2.2.2 病毒转染细胞 | 第68页 |
| 5.2.2.3 western blot检测PARD6A沉默的效果 | 第68页 |
| 5.2.3 沉默PARD6A对癌细胞增殖的影响 | 第68页 |
| 5.2.4 沉默PARD6A对癌细胞迁移侵润的影响 | 第68页 |
| 5.2.5 shPARD6A在小鼠体内的作用 | 第68-70页 |
| 5.2.5.1 卵巢癌细胞株在无胸腺小鼠中肺转移模型的建立 | 第68-69页 |
| 5.2.5.2 shPARD6A在小鼠体内对卵巢癌细胞转移的影响 | 第69页 |
| 5.2.5.3 石蜡切片的制作和染色 | 第69-70页 |
| 5.3 结果与分析 | 第70-78页 |
| 5.3.1 PARD6A shRNA的构建 | 第70-72页 |
| 5.3.2 shPARD6A在SKOV3细胞株中的敲除效果 | 第72页 |
| 5.3.3 shPARD6A对SKOV3细胞增殖无影响 | 第72-73页 |
| 5.3.4 shPARD6A抑制卵巢癌细胞SKOV3的迁移和侵润 | 第73-74页 |
| 5.3.5 卵巢癌细胞敲减PARD6A基因，可以显著地降低其在小鼠体内的转移 | 第74-78页 |
| 5.4 讨论与小结 | 第78-79页 |
| 第六章 总结与展望 | 第79-81页 |
| 6.1 工作总结 | 第79页 |
| 6.2 工作展望 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 在学期间发表的学术论文及其他科研成果 | 第88页 |
