| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第一章 食线虫真菌研究概况及长链非编码RNA研究进展 | 第11-19页 |
| 1 食线虫真菌的研究概况 | 第11-12页 |
| 2 长非编码RNA的功能及研究进展 | 第12-16页 |
| 3 SET-domain蛋白的研究进展 | 第16-18页 |
| 4 本文研究研究思路及意义 | 第18-19页 |
| 第二章 寡孢节丛孢SET-domain蛋白的序列分析及表达分析 | 第19-31页 |
| 1 前言 | 第19页 |
| 2 寡孢节丛孢SET-domain蛋白的序列分析 | 第19-20页 |
| 2.1 SET-domain蛋白序列来源 | 第19-20页 |
| 2.2 SET-domain功能结构域分析 | 第20页 |
| 2.3 SET-domain系统发育分析 | 第20页 |
| 3 寡孢节丛孢SET-domain蛋白的表达分析 | 第20-23页 |
| 3.1 线虫提取液制备 | 第20-21页 |
| 3.2 寡孢节丛孢野生菌株的诱导 | 第21页 |
| 3.3 RNA的提取及检测 | 第21-22页 |
| 3.4 RNA的反转录 | 第22页 |
| 3.5 Real-Time PCR反应体系 | 第22-23页 |
| 4 结果分析 | 第23-30页 |
| 4.1 SET-domain基因检索结果 | 第23-24页 |
| 4.2 SET-domain基因功能分析结果 | 第24-25页 |
| 4.3 SET-domain基因系统发育分析 | 第25-26页 |
| 4.4 SET-domain基因表达分析结果 | 第26-30页 |
| 4.4.1 RNA提取 | 第26页 |
| 4.4.2 RT-PCR分析 | 第26-30页 |
| 5 讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 寡孢节丛孢SET-domain蛋白基因敲除质粒构建 | 第31-47页 |
| 1 前言 | 第31-32页 |
| 2 材料与仪器 | 第32-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 2.2 主要试剂和培养基配方 | 第33-34页 |
| 2.3 实验用仪器设备 | 第34页 |
| 2.4 实验用酶和试剂盒 | 第34页 |
| 3 实验方法 | 第34-43页 |
| 3.1 基因上下游引物设计及扩增 | 第34-36页 |
| 3.2 寡孢节丛孢基因组DNA提取 | 第36-37页 |
| 3.3 质粒PSCN44的提取 | 第37页 |
| 3.4 质粒pRS426的酶切 | 第37-38页 |
| 3.5 酵母转化 | 第38-40页 |
| 3.5.1 化学转化 | 第38-39页 |
| 3.5.2 电转化 | 第39-40页 |
| 3.6 酵母转化子验证 | 第40-41页 |
| 3.7 大肠杆菌(DH5α)的转化 | 第41-42页 |
| 3.8 大肠杆菌转化子验证 | 第42-43页 |
| 4. 实验结果 | 第43-46页 |
| 4.1 寡孢节丛孢中五个set-domain基因5'端和3'端同源片段及hph扩增 | 第43-44页 |
| 4.2 酵母转化结果 | 第44-45页 |
| 4.3 大肠杆菌中全长片段的获得 | 第45-46页 |
| 5 讨论 | 第46-47页 |
| 第四章 寡孢节丛孢原生质体的制备、转化及转化子的筛选和验证 | 第47-64页 |
| 1 前言 | 第47页 |
| 2 实验材料和仪器 | 第47-49页 |
| 2.1 实验菌株 | 第47-48页 |
| 2.2 实验所用载体 | 第48页 |
| 2.3 主要溶液及培养基 | 第48-49页 |
| 3 实验方法 | 第49-57页 |
| 3.1 敲除载体全长片段扩增及回收 | 第49页 |
| 3.2 寡孢节丛孢原生质体的制备 | 第49-50页 |
| 3.3 寡孢节丛孢原生质体的转化 | 第50页 |
| 3.4 寡孢节丛孢敲除转化子基因组提取 | 第50-51页 |
| 3.5 敲除转化子的PCR验证 | 第51-52页 |
| 3.6 敲除转化子的Southern blot验证 | 第52-57页 |
| 4 实验结果 | 第57-61页 |
| 4.1 全长片段的扩增 | 第57-58页 |
| 4.2 原生质体的制备 | 第58页 |
| 4.3 转化子PCR验证 | 第58-59页 |
| 4.4 转化子Southern blot验证 | 第59-61页 |
| 5 讨论 | 第61-64页 |
| 5.1 原生质体制备及转化 | 第61-62页 |
| 5.2 敲除转化子的PCR验证 | 第62页 |
| 5.3 敲除转化子的Southern blot验证 | 第62-64页 |
| 第五章 寡孢节丛孢野生型菌株与敲除菌株的表型特征比较和分析 | 第64-74页 |
| 1 前言 | 第64页 |
| 2 实验材料及仪器 | 第64-65页 |
| 2.1 实验菌株 | 第64页 |
| 2.2 实验仪器 | 第64页 |
| 2.3 主要药品 | 第64-65页 |
| 2.4 实验培养基 | 第65页 |
| 3 实验方法 | 第65-67页 |
| 3.1 实验线虫的培养 | 第65-66页 |
| 3.2 寡孢节丛孢原始菌株和突变菌株的表型观察和捕食线虫能力比较 | 第66-67页 |
| 4 实验结果 | 第67-72页 |
| 4.1 潮霉素稳定性检测 | 第67页 |
| 4.2 生长速率的比较 | 第67-68页 |
| 4.3 产孢比较 | 第68-69页 |
| 4.4 产捕食器官形态数量的比较 | 第69-71页 |
| 4.5 杀线虫能力比较 | 第71-72页 |
| 5 小结 | 第72-74页 |
| 第六章 寡孢节丛孢野生型菌株及△661、△197敲除菌株的产孢形成相关基因的Real-TimePCR分析 | 第74-82页 |
| 1 前言 | 第74页 |
| 2 实验材料及仪器 | 第74页 |
| 3 实验方法 | 第74-75页 |
| 3.1 菌丝样品的收集 | 第74-75页 |
| 3.2 寡孢节丛孢及敲除菌株样品总RNA的提取及反转录 | 第75页 |
| 3.3 Real-Time PCR(相对定量PCR) | 第75页 |
| 4 实验结果 | 第75-80页 |
| 4.1 溶解曲线分析 | 第75-76页 |
| 4.2 定量结果分析 | 第76-79页 |
| 4.3 定量结果的跑胶 | 第79-80页 |
| 5 讨论 | 第80-82页 |
| 第七章 全文小结与展望 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-89页 |
| 附录 | 第89-95页 |
| 附录1 论文中使用的缩写及中英文对照 | 第89-90页 |
| 附录2 Real-Time PCR引物 | 第90-92页 |
| 附录3 论文中使用的质粒图 | 第92-93页 |
| 附录4 常用的数据库和网上生物学资源 | 第93-94页 |
| 附录5 在读硕士期间（待）发表、撰写的学术论文 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
