| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-13页 |
| 1 引言 | 第13-37页 |
| ·蒙古冰草概况 | 第13-15页 |
| ·蒙古冰草的植物学及生物学特征 | 第13页 |
| ·蒙古冰草研究进展 | 第13-15页 |
| ·胚胎晚期丰富（LEA）蛋白概述 | 第15-21页 |
| ·LEA 蛋白的分类及结构 | 第15-19页 |
| ·LEA 蛋白的定位 | 第19-21页 |
| ·RNA 干扰技术 | 第21-24页 |
| ·RNAi 的发现 | 第21页 |
| ·RNAi 的作用机制及特点 | 第21-23页 |
| ·RNAi 在植物基因功能研究中的应用 | 第23-24页 |
| ·植物转基因技术 | 第24-28页 |
| ·农杆菌介导转化方法 | 第24-25页 |
| ·基因枪转化法 | 第25页 |
| ·种质系统法 | 第25-27页 |
| ·聚乙二醇法 | 第27页 |
| ·电击法 | 第27-28页 |
| ·超声波法 | 第28页 |
| ·转基因植物的检测与鉴定 | 第28-35页 |
| ·植物基因工程中常用的报告基因 | 第29-30页 |
| ·植物基因工程中常用的选择基因 | 第30-32页 |
| ·PCR 检测 | 第32页 |
| ·斑点杂交和 Southern 杂交检测 | 第32-33页 |
| ·Northern 杂交或RT-PCR 检测 | 第33-34页 |
| ·Western 杂交或酶联免疫技术（ELISA） | 第34-35页 |
| ·本研究的目的意义及内容 | 第35-37页 |
| 2 蒙古冰草 MwLEA3 基因的分离 | 第37-45页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·植物材料 | 第37页 |
| ·质粒及菌株 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-42页 |
| ·引物设计 | 第37页 |
| ·蒙古冰草总RNA 的提取 | 第37-38页 |
| ·MwLEA3 基因的 RT-PCR 扩增 | 第38-39页 |
| ·PCR 扩增产物的回收 | 第39页 |
| ·PCR 产物的克隆 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的检测 | 第40-41页 |
| ·测序 | 第41-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-43页 |
| ·MwLEA3 基因的 RT-PCR 扩增 | 第42页 |
| ·重组质粒的PCR 检测 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的酶切检测 | 第43页 |
| ·测序结果分析 | 第43页 |
| ·小结 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| 3 蒙古冰草MwLEA3 基因的亚细胞定位 | 第45-54页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·植物材料 | 第45页 |
| ·质粒及菌株 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-49页 |
| ·引物设计 | 第45页 |
| ·MwLEA3 基因的分离 | 第45-47页 |
| ·MwLEA3 基因亚细胞定位融合蛋白载体的构建 | 第47-48页 |
| ·基因枪法转化洋葱细胞及检测 | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-52页 |
| ·MwLEA3 基因的分离 | 第49-50页 |
| ·MwLEA3 基因亚细胞定位的融合蛋白载体构建 | 第50-51页 |
| ·蒙古冰草MwLEA3 基因的亚细胞定位 | 第51-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| 4 蒙古冰草MwLEA3 基因遗传转化烟草及功能研究 | 第54-81页 |
| ·材料 | 第54页 |
| ·植物材料 | 第54页 |
| ·菌株及载体 | 第54页 |
| ·主要试剂 | 第54页 |
| ·方法 | 第54-66页 |
| ·引物设计 | 第54-55页 |
| ·PCR 产物的克隆及测序 | 第55页 |
| ·植物表达载体构建 | 第55-57页 |
| ·植物表达载体的农杆菌转化及鉴定 | 第57-59页 |
| ·根癌农杆菌介导的烟草遗传转化 | 第59-60页 |
| ·转基因烟草植株的 PCR 检测 | 第60-61页 |
| ·转基因烟草的 PCR-Southern 检测 | 第61-64页 |
| ·转基因烟草的 RT-PCR 检测 | 第64页 |
| ·转基因烟草 T_0代的抗旱性分析 | 第64-66页 |
| ·转基因烟草 T_1代抗生素抗性检测 | 第66页 |
| ·结果与分析 | 第66-77页 |
| ·植物表达载体pCAM-MwLEA3 的构建 | 第66-68页 |
| ·植物表达载体的农杆菌转化及鉴定 | 第68页 |
| ·根癌农杆菌介导的烟草遗传转化 | 第68-70页 |
| ·转基因烟草植株的 PCR 检测 | 第70-71页 |
| ·转基因烟草植株的 PCR-Southern 检测 | 第71-72页 |
| ·转基因烟草的 RT-PCR 检测 | 第72页 |
| ·转基因烟草植株的抗旱性分析 | 第72-76页 |
| ·转基因烟草 T1代卡那霉素抗性检测 | 第76-77页 |
| ·小结 | 第77-78页 |
| ·讨论 | 第78-81页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第78-79页 |
| ·转 MwLEA3 基因植株分子水平的检测 | 第79页 |
| ·蒙古冰草 MwLEA3 基因功能验证 | 第79-81页 |
| 5 蒙古冰草 MwLEA3 基因ihpRNA 表达载体构建及遗传转化 | 第81-92页 |
| ·材料 | 第81页 |
| ·植物材料 | 第81页 |
| ·质粒和菌株 | 第81页 |
| ·主要试剂 | 第81页 |
| ·方法 | 第81-84页 |
| ·蒙古冰草 MwLEA3 基因部分片段的分离 | 第81-82页 |
| ·ihpRNA 表达载体的构建与鉴定 | 第82页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第82页 |
| ·冻融法转化及鉴定 | 第82-83页 |
| ·蒙古冰草愈伤组织诱导 | 第83页 |
| ·蒙古冰草的遗传转化 | 第83-84页 |
| ·结果与分析 | 第84-89页 |
| ·蒙古冰草MwLEA3 基因部分片段的分离 | 第84-85页 |
| ·ihpRNA 表达载体的构建与鉴定 | 第85-89页 |
| ·ihpRNA 表达载体转化根癌农杆菌及检测 | 第89页 |
| ·蒙古冰草愈伤组织诱导及转化 | 第89页 |
| ·小结 | 第89-90页 |
| ·讨论 | 第90-92页 |
| ·基因功能的反向遗传学研究 | 第90-91页 |
| ·农杆菌转化蒙古冰草 | 第91-92页 |
| 6 蒙古冰草基因组类反转录转座子基因同源序列的克隆与序列分析 | 第92-99页 |
| ·材料 | 第92页 |
| ·植物材料 | 第92页 |
| ·菌株、质粒及主要试剂 | 第92页 |
| ·方法 | 第92-94页 |
| ·蒙古冰草基因组DNA 的提取 | 第92页 |
| ·目的基因片段的扩增与回收 | 第92-93页 |
| ·目的基因片段的克隆与转化 | 第93页 |
| ·PCR 鉴定阳性重组质粒 | 第93页 |
| ·目的片段的测序分析 | 第93-94页 |
| ·结果与分析 | 第94-96页 |
| ·蒙古冰草反转录转座子基因片段的获得 | 第94-95页 |
| ·测序结果及序列分析 | 第95-96页 |
| ·小结 | 第96-98页 |
| ·讨论 | 第98-99页 |
| 7 结论 | 第99-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-111页 |
| 作者简介 | 第111页 |
