| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 第一部分 利用CRISPR/Cas9构建敲除整合素αv或β3亚基的4T1细胞株 | 第14-38页 |
| 1 材料 | 第15-16页 |
| 1.1 细胞、试剂、仪器 | 第15页 |
| 1.2 主要试剂的配制 | 第15-16页 |
| 2 方法 | 第16-27页 |
| 2.1 主要物质的获取 | 第16-23页 |
| 2.2 sgRNA靶点选择及其寡核苷酸链合成 | 第23-24页 |
| 2.3 lentiCRISPRv2-sgRNA载体构建 | 第24页 |
| 2.4 细胞培养和细胞转染包装慢病毒 | 第24-25页 |
| 2.5 慢病毒感染4T1细胞和筛选整合素αvβ3稳定敲除细胞株 | 第25-26页 |
| 2.6 qRT-PCR检测整合素αvβ3稳定敲除细胞株mRNA的表达量 | 第26-27页 |
| 2.7 Western blot检测整合素αvβ3稳定敲除细胞株蛋白的表达水平 | 第27页 |
| 3 结果 | 第27-36页 |
| 3.1 sgRAN靶点以及寡核苷酸序列设计 | 第27页 |
| 3.2 lentiCRISPRv2-sgRNA载体PCR鉴定结果及测序结果 | 第27-30页 |
| 3.3 细胞转染包装慢病毒结果 | 第30页 |
| 3.4 确定嘌呤霉素筛选细胞的浓度 | 第30-33页 |
| 3.5 慢病毒感染目的细胞后嘌呤霉素筛选阳性细胞 | 第33-34页 |
| 3.6 建立稳定敲除整合素αv或β3亚基的4T1细胞株 | 第34页 |
| 3.7 整合素αvβ3稳定敲除细胞株mRNA的表达情况 | 第34-35页 |
| 3.8 整合素αvβ3稳定敲除细胞株蛋白质的表达水平 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-38页 |
| 第二部分 敲除整合素αvβ3基因对4T1细胞迁移粘附能力的影响 | 第38-55页 |
| 1 材料 | 第40页 |
| 1.1 细胞、试剂 | 第40页 |
| 1.2 主要溶液的配制 | 第40页 |
| 2 方法 | 第40-43页 |
| 2.1 细胞增殖活性检测 | 第40-41页 |
| 2.2 细胞划痕实验 | 第41页 |
| 2.3 细胞迁移能力检测 | 第41-42页 |
| 2.4 细胞粘附能力检测 | 第42-43页 |
| 3 结果 | 第43-51页 |
| 3.1 CCK-8检测细胞增殖活性 | 第43-44页 |
| 3.2 划痕实验 | 第44-46页 |
| 3.3 细胞迁移实验 | 第46-49页 |
| 3.4 细胞粘附实验 | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51-55页 |
| 第三部分 整合素αvβ3基因敲除后4T1细胞内主要信号分子的改变 | 第55-65页 |
| 1 材料 | 第57-58页 |
| 1.1 细胞、试剂 | 第57页 |
| 1.2 主要试剂的配制 | 第57-58页 |
| 2 方法 | 第58-59页 |
| 2.1 BSP作用于4T1细胞处理时间及处理浓度的探索 | 第58页 |
| 2.2 WB检测几种信号通路分子的表达量及磷酸化情况 | 第58-59页 |
| 3 结果 | 第59-63页 |
| 3.1 不同浓度BSP作用于小鼠乳腺癌4T1细胞后AKT磷酸化的变化 | 第59-60页 |
| 3.2 BSP作用于后细胞内几种主要信号分子的表达及其磷酸化情况 | 第60-63页 |
| 4 讨论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-79页 |
| 全文总结 | 第79-80页 |
| 研究生期间获得的成果 | 第80-81页 |
| 中英文缩略词表 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
