| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 文献综述 | 第14-34页 |
| 第一章 杆状病毒表达系统在疫苗领域应用的研究进展 | 第14-34页 |
| 1.1 杆状病毒简介 | 第14-15页 |
| 1.2 杆状病毒表达系统 | 第15-18页 |
| 1.2.1 杆状病毒表达系统的原则 | 第15-16页 |
| 1.2.2 杆状病毒表达系统的发展 | 第16-18页 |
| 1.2.3 昆虫细胞系的发展 | 第18页 |
| 1.3 杆状病毒表达系统生产的疫苗 | 第18-27页 |
| 1.3.1 杆状病毒表达系统生产的商品化疫苗 | 第18-19页 |
| 1.3.2 杆状病毒表达系统生产的亚单位疫苗 | 第19-21页 |
| 1.3.3 杆状病毒表达系统生产的病毒样颗粒疫苗 | 第21-24页 |
| 1.3.4 杆状病毒表面展示载体作为疫苗载体 | 第24页 |
| 1.3.5 BacMam作为疫苗载体 | 第24-27页 |
| 1.4 杆状病毒的佐剂效应 | 第27页 |
| 1.5 杆状病毒作为疫苗载体的安全性 | 第27-28页 |
| 1.6 杆状病毒表达系统未来展望 | 第28-31页 |
| 1.6.1 跨越蛋白特异性表达的障碍 | 第28页 |
| 1.6.2 减少基因组的不稳定性 | 第28-30页 |
| 1.6.3 最小化杆状病毒基因组 | 第30页 |
| 1.6.4 建立无病毒粒子的杆状病毒表达系统 | 第30-31页 |
| 1.7 结论 | 第31页 |
| 1.8 本研究目的意义及技术路线简介 | 第31-34页 |
| 1.8.1 研究的目的意义 | 第31-32页 |
| 1.8.2 技术路线 | 第32-34页 |
| 试验研究 | 第34-103页 |
| 第二章 一种高效杆状病毒表达系统的构建 | 第34-62页 |
| 2.1 材料 | 第34-35页 |
| 2.1.1 细胞与菌株 | 第34-35页 |
| 2.1.2 载体与质粒 | 第35页 |
| 2.1.3 工具酶及主要试剂 | 第35页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第35页 |
| 2.2 方法 | 第35-50页 |
| 2.2.1 重组杆状病毒转移载体的构建 | 第35-39页 |
| 2.2.2 重组穿梭载体（Bacmid）的构建 | 第39-43页 |
| 2.2.3 重组杆状病毒的获得及鉴定 | 第43-44页 |
| 2.2.4 重组杆状病毒的鉴定与分析 | 第44-46页 |
| 2.2.5 验证翻译增强子Syn21和P10UTR在Cap蛋白表达中的作用 | 第46-50页 |
| 2.2.6 检验翻译增强子对CMV启动子介导的转基因表达的作用 | 第50页 |
| 2.3 结果 | 第50-59页 |
| 2.3.1 重组杆状病毒转移载体的构建 | 第50-51页 |
| 2.3.2 重组穿梭载体的构建及鉴定 | 第51页 |
| 2.3.3 重组杆状病毒的滴度测定 | 第51-52页 |
| 2.3.4 重组病毒感染Sf9细胞的荧光观察 | 第52-53页 |
| 2.3.5 Western blotting分析GFP的表达 | 第53页 |
| 2.3.6 多功能酶标仪定量分析GFP的表达量 | 第53-54页 |
| 2.3.7 联合应用Syn21和P10UTR翻译增强子对Cap蛋白表达的增强作用 | 第54-58页 |
| 2.3.8 翻译增强子对CMV启动子介导的GFP基因表达的作用 | 第58-59页 |
| 2.4 讨论 | 第59-61页 |
| 2.4.1 翻译增强子的筛选及功能验证 | 第59-60页 |
| 2.4.2 PCV2病毒样颗粒生产的优化 | 第60-61页 |
| 2.5 小结 | 第61-62页 |
| 第三章 RNA干扰抑制子P19的功能分析及应用 | 第62-79页 |
| 3.1 材料 | 第62-63页 |
| 3.1.1 质粒、菌株、病毒和细胞 | 第62页 |
| 3.1.2 工具酶及主要试剂 | 第62-63页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第63页 |
| 3.2 方法 | 第63-69页 |
| 3.2.1 P19在Sf9细胞中抑制RNA干扰功能的验证 | 第63-65页 |
| 3.2.2 P19表达对重组病毒的影响 | 第65-66页 |
| 3.2.3 P19的表达时相对重组病毒的影响 | 第66-69页 |
| 3.3 结果 | 第69-77页 |
| 3.3.1 P19基因的PCR扩增及克隆结果 | 第69页 |
| 3.3.2 P19基因的定点突变结果 | 第69-70页 |
| 3.3.3 P19表达载体的构建 | 第70-71页 |
| 3.3.4 GFP SiRNA功能的验证 | 第71页 |
| 3.3.5 P19功能的验证 | 第71-72页 |
| 3.3.6 瞬时表达P19的重组病毒的验证 | 第72页 |
| 3.3.7 P19瞬时表达对重组病毒滴度的影响 | 第72-73页 |
| 3.3.8 P19瞬时表达对外源蛋白表达量的影响 | 第73页 |
| 3.3.9 不同表达时相的P19重组表达病毒的构建及验证 | 第73-74页 |
| 3.3.10 P19的表达时相对重组病毒增殖滴度的影响 | 第74-76页 |
| 3.3.11 P19的表达时相对外源蛋白表达量的影响 | 第76-77页 |
| 3.4 讨论 | 第77-78页 |
| 3.4.1 TBSV P19的RNA干扰抑制功能 | 第77页 |
| 3.4.2 TBSV P19的表达对重组病毒的影响 | 第77-78页 |
| 3.4.3 TBSV P19的不同表达时相对重组病毒的影响 | 第78页 |
| 3.5 小结 | 第78-79页 |
| 第四章 拮抗补体的重组杆状病毒的构建 | 第79-92页 |
| 4.1 材料 | 第79-80页 |
| 4.1.1 质粒、菌株、病毒和细胞 | 第79-80页 |
| 4.1.2 工具酶及主要试剂 | 第80页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第80页 |
| 4.2 方法 | 第80-84页 |
| 4.2.1 引物设计 | 第80-81页 |
| 4.2.2 杆状病毒表面展示载体的构建及验证 | 第81-82页 |
| 4.2.3 VSVG-ED假型化杆状病毒表面展示载体的构建 | 第82页 |
| 4.2.4 表面展示补体抑制剂的重组载体的构建 | 第82页 |
| 4.2.5 重组杆状病毒的获得及鉴定 | 第82-83页 |
| 4.2.6 重组杆状病毒抑制小鼠小鼠补体活性检测 | 第83页 |
| 4.2.7 重组杆状病毒抑制猪血清补体活性检测 | 第83-84页 |
| 4.3 结果 | 第84-89页 |
| 4.3.1 杆状病毒表面展示载体的构建及验证 | 第84页 |
| 4.3.2 重组病毒的荧光观察 | 第84-85页 |
| 4.3.3 重组杆状病毒滴度的测定 | 第85页 |
| 4.3.4 重组杆状病毒的IFA分析 | 第85-86页 |
| 4.3.5 重组杆状病毒的Western blotting分析 | 第86页 |
| 4.3.6 重组杆状病毒的共聚焦显微镜分析 | 第86-87页 |
| 4.3.7 重组病毒拮抗小鼠血清补体能力的检测 | 第87-88页 |
| 4.3.8 重组病毒拮抗猪血清补体能力的检测 | 第88-89页 |
| 4.4 讨论 | 第89-91页 |
| 4.4.1 血清补体与杆状病毒 | 第89页 |
| 4.4.2 杆状病毒表面修饰 | 第89-91页 |
| 4.5 小结 | 第91-92页 |
| 第五章 猪瘟新型杆状病毒载体疫苗的研究 | 第92-103页 |
| 5.1 材料 | 第92-93页 |
| 5.1.1 试验动物及疫苗 | 第92页 |
| 5.1.2 质粒、细胞和毒株 | 第92页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第92-93页 |
| 5.1.4 主要仪器 | 第93页 |
| 5.2 方法 | 第93-96页 |
| 5.2.1 重组杆状病毒的构建 | 第93-94页 |
| 5.2.2 重组杆状病毒的鉴定 | 第94页 |
| 5.2.3 动物实验 | 第94-96页 |
| 5.3 结果 | 第96-101页 |
| 5.3.1 E2和Syn21-E2的PCR扩增 | 第96页 |
| 5.3.2 重组杆状病毒质粒的酶切鉴定 | 第96-97页 |
| 5.3.3 重组Bacmid的PCR鉴定 | 第97页 |
| 5.3.4 重组杆状病毒的PCR鉴定 | 第97-98页 |
| 5.3.5 Western blotting分析蛋白表达 | 第98页 |
| 5.3.6 重组杆状病毒转导IEC细胞的间接免疫荧光鉴定 | 第98-99页 |
| 5.3.7 重组病毒拮抗猪血清补体能力的检测 | 第99页 |
| 5.3.8 猪瘟特异性抗体水平检测 | 第99-100页 |
| 5.3.9 中和抗体水平检测 | 第100-101页 |
| 5.3.10 IFN-γ含量检测 | 第101页 |
| 5.4 讨论 | 第101-102页 |
| 5.5 小结 | 第102-103页 |
| 结论 | 第103-104页 |
| 本研究创新点 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-122页 |
| 附录 | 第122-125页 |
| 缩略语及中英文对照 | 第125-127页 |
| 致谢 | 第127-129页 |
| 作者简介 | 第129页 |
