| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-28页 |
| 1.1 甲状旁腺激素的致病机理及其导致的病症的治疗 | 第12-15页 |
| 1.1.1 甲状旁腺激素概述 | 第12-13页 |
| 1.1.2 慢性肾衰竭及甲状旁腺激素的致病机理 | 第13-14页 |
| 1.1.3 降低肾衰竭病人体内过多甲状旁腺激素的方法 | 第14-15页 |
| 1.2 纳米抗体技术 | 第15-21页 |
| 1.2.1 纳米抗体的发现及结构特征 | 第15-17页 |
| 1.2.2 纳米抗体的理化生性质及其应用 | 第17-19页 |
| 1.2.3 噬菌体展示库简介 | 第19-20页 |
| 1.2.4 纳米抗体的筛选 | 第20-21页 |
| 1.3 蛋白修饰技术 | 第21-27页 |
| 1.3.1 蛋白修饰的目的 | 第21页 |
| 1.3.2 蛋白的修饰方法 | 第21-26页 |
| 1.3.3 醛基标签 | 第26-27页 |
| 1.3.4 巯基标签 | 第27页 |
| 1.4 本论文的研究目的、内容及意义 | 第27-28页 |
| 2 带醛基标签的甲状旁腺激素的制备 | 第28-46页 |
| 2.1 引言 | 第28页 |
| 2.2 实验材料 | 第28-30页 |
| 2.2.1 材料及试剂 | 第28-29页 |
| 2.2.2 主要仪器及耗材 | 第29-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-35页 |
| 2.3.1 FGE及ald_(13)-PTH基因的合成 | 第30-31页 |
| 2.3.2 重组质粒pET23a-ald_(13)-PTH的构建、筛选及表达 | 第31-32页 |
| 2.3.3 重组蛋白ald_(13)-PTH的可溶性考察 | 第32页 |
| 2.3.4 重组蛋白ald_(13)-PTH表达条件优化 | 第32-33页 |
| 2.3.5 化学合成的FGE相关质粒的构建、筛选及表达 | 第33页 |
| 2.3.6 重组质粒pET28a-ald_(13)-PTH的构建、筛选及表达 | 第33页 |
| 2.3.7 改变重组质粒pET23a-ald_(13)-PTH的抗性 | 第33-34页 |
| 2.3.8 共表达体系的建立 | 第34-35页 |
| 2.3.9 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第35页 |
| 2.3.10 琼脂糖凝胶电泳 | 第35页 |
| 2.4 实验结果及讨论 | 第35-45页 |
| 2.4.1 重组质粒pET23a-ald_(13)-PTH的构建、筛选及表达 | 第35-37页 |
| 2.4.2 重组蛋白ald_(13)-PTH的可溶性考察 | 第37页 |
| 2.4.3 重组蛋白ald_(13)-PTH表达条件优化 | 第37-41页 |
| 2.4.4 化学合成的FGE相关质粒的构建、筛选及表达 | 第41-42页 |
| 2.4.5 不相容质粒共表达体系的建立 | 第42-45页 |
| 2.5 小结 | 第45-46页 |
| 3 带巯基标签的甲状旁腺激素的制备 | 第46-55页 |
| 3.1 引言 | 第46页 |
| 3.2 实验材料 | 第46-47页 |
| 3.2.1 材料及试剂 | 第46-47页 |
| 3.2.2 主要仪器及耗材 | 第47页 |
| 3.3 实验方法 | 第47-51页 |
| 3.3.1 PTH-C基因的获得及载体构建 | 第47-48页 |
| 3.3.2 PTH-C蛋白的表达 | 第48页 |
| 3.3.3 蛋白的可溶性考察 | 第48页 |
| 3.3.4 蛋白预处理——初步纯化 | 第48-49页 |
| 3.3.5 SP强阳离子交换层析——精分离 | 第49-50页 |
| 3.3.6 测定目的蛋白的纯度及浓度 | 第50-51页 |
| 3.4 实验结果及讨论 | 第51-54页 |
| 3.4.1 PTH-C蛋白的表达 | 第51页 |
| 3.4.2 蛋白的可溶性考察 | 第51-52页 |
| 3.4.3 蛋白的分离纯化 | 第52-54页 |
| 3.5 小结 | 第54-55页 |
| 4 抗人PTH纳米抗体的筛选 | 第55-75页 |
| 4.1 引言 | 第55页 |
| 4.2 实验材料 | 第55-57页 |
| 4.2.1 材料及试剂 | 第55-56页 |
| 4.2.2 主要仪器及耗材 | 第56-57页 |
| 4.3 实验方法 | 第57-63页 |
| 4.3.1 纳米抗体库的建立 | 第57页 |
| 4.3.2 噬菌体的液体扩增 | 第57页 |
| 4.3.3 噬菌体滴度的测定 | 第57-58页 |
| 4.3.4 纳米抗体的筛选 | 第58-59页 |
| 4.3.5 序列分析 | 第59-60页 |
| 4.3.6 ELISA鉴定单克隆噬菌体活性 | 第60-61页 |
| 4.3.7 亲和常数的估算 | 第61-63页 |
| 4.4 实验结果及讨论 | 第63-74页 |
| 4.4.1 纳米抗体的筛选 | 第63-64页 |
| 4.4.2 测序分析 | 第64-69页 |
| 4.4.3 ELISA鉴定单克隆噬菌体活性 | 第69-71页 |
| 4.4.4 亲和常数的估算 | 第71-74页 |
| 4.5 小结 | 第74-75页 |
| 结论 | 第75-76页 |
| 展望 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-82页 |
| 附录A FGE基因序列 | 第82-84页 |
| 附录B ald_(13)-PTH基因序列及蛋白序列 | 第84-85页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
