牛脾脏抗菌肽BSN27的分离、纯化及活性分析
| 缩略语表 | 第9-11页 |
| 摘要 | 第11-12页 |
| ABSTRACT | 第12页 |
| 一 文献综述 | 第13-31页 |
| 1.1 抗菌肽的发现 | 第13-14页 |
| 1.2 抗菌肽的理化性质 | 第14-15页 |
| 1.3 抗菌肽的结构 | 第15-16页 |
| 1.3.1 β-折叠抗菌肽 | 第15页 |
| 1.3.2 α-螺旋抗菌肽 | 第15-16页 |
| 1.3.3 伸展螺旋型抗菌肽 | 第16页 |
| 1.3.4 具环状结构型抗菌肽 | 第16页 |
| 1.3.5 无规则结构的抗菌肽 | 第16页 |
| 1.4 抗菌肽的生物活性 | 第16-20页 |
| 1.4.1 抗细菌活性 | 第16-18页 |
| 1.4.2 抗真菌活性 | 第18页 |
| 1.4.3 抗病毒活性 | 第18页 |
| 1.4.4 抗寄生虫活性 | 第18-19页 |
| 1.4.5 免疫调节 | 第19-20页 |
| 1.5 抗菌肽的分类 | 第20-22页 |
| 1.5.1 微生物源抗菌肽 | 第20页 |
| 1.5.2 植物源抗菌肽 | 第20页 |
| 1.5.3 动物源抗菌肽 | 第20-22页 |
| 1.6 抗菌肽的作用机制 | 第22-23页 |
| 1.7 牛源抗菌肽 | 第23-27页 |
| 1.7.1 牛源防御素 | 第23-24页 |
| 1.7.2 牛源cathelicidins | 第24-26页 |
| 1.7.3 阴离子抗菌肽（SAAPs） | 第26页 |
| 1.7.4 乳铁素 | 第26-27页 |
| 1.7.5 牛血红蛋白源抗菌肽 | 第27页 |
| 1.8 天然抗菌肽的分离纯化方法 | 第27-30页 |
| 1.8.1 沉淀、膜分离和离心法 | 第27-28页 |
| 1.8.2 萃取分离法 | 第28页 |
| 1.8.3 色谱分离法 | 第28-29页 |
| 1.8.4 电泳分离法 | 第29页 |
| 1.8.5 亲和分离法 | 第29-30页 |
| 1.9 本研究的目的和意义 | 第30-31页 |
| 二 材料与方法 | 第31-41页 |
| 2.1 试验材料 | 第31-32页 |
| 2.1.1 脾脏的来源 | 第31页 |
| 2.1.2 抗生素及菌种 | 第31页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第31页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第31-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-33页 |
| 2.2.1 牛脾脏抗菌肽粗提物的制备 | 第32页 |
| 2.2.2 牛脾脏抗菌肽粗提物的活性检测 | 第32-33页 |
| 2.3 粗提物阳离子交换层析 | 第33-35页 |
| 2.3.1 阳离子交换树脂（填料）的处理 | 第33页 |
| 2.3.2 交换柱的填装 | 第33-34页 |
| 2.3.3 样品的处理及上样 | 第34页 |
| 2.3.4 样品的洗脱分离和冻干 | 第34页 |
| 2.3.5 层析柱填料的处理和保存 | 第34-35页 |
| 2.4 离子交换层析中收集样品的活性检测 | 第35-37页 |
| 2.4.1 细菌浓度和添加量的计算 | 第35页 |
| 2.4.2 琼脂平板扩散检测两种组分活性 | 第35-37页 |
| 2.5 阳离子肽反相高效液相色谱纯化 | 第37-38页 |
| 2.5.1 柱子的连接和平衡 | 第37页 |
| 2.5.2 时间程序设置、上样以及分离峰的收集 | 第37-38页 |
| 2.5.3 色谱柱的清洗和保存 | 第38页 |
| 2.5.4 收集峰的冻干和保存 | 第38页 |
| 2.6 分离峰的活性检测 | 第38页 |
| 2.7 活性肽的分子量测定和序列分析 | 第38-39页 |
| 2.7.1 分子量测定 | 第38-39页 |
| 2.7.2 序列分析 | 第39页 |
| 2.8 多肽合成及合成肽活性检测 | 第39-41页 |
| 三 结果与分析 | 第41-49页 |
| 3.1 粗提物的制备量及其活性分析 | 第41-42页 |
| 3.1.1 脾脏抗菌肽粗提物的制备量 | 第41页 |
| 3.1.2 粗提物的抗菌活性检测 | 第41-42页 |
| 3.2 离子交换层析分离和分离峰的活性测定 | 第42-43页 |
| 3.2.1 离子交换层析中峰的收集 | 第42页 |
| 3.2.2 离子交换肽的质量 | 第42页 |
| 3.2.3 分离峰的活性检测 | 第42-43页 |
| 3.3 反向高效液相色谱纯化结果 | 第43-46页 |
| 3.3.1 反向高效液相色谱纯化峰的采集 | 第43-44页 |
| 3.3.2 分离峰液的采集 | 第44-45页 |
| 3.3.3 各峰的活性检测结果 | 第45-46页 |
| 3.4 质谱分析 | 第46-47页 |
| 3.4.1 分子量测定及其结果 | 第46-47页 |
| 3.4.2 序列分析 | 第47页 |
| 3.4.3 APD3数据库初步分析 | 第47页 |
| 3.5 多肽合成及合成肽初步活性检测结果 | 第47-49页 |
| 3.5.1 合成多肽的溶解 | 第47-48页 |
| 3.5.2 合成肽的活性检测 | 第48-49页 |
| 四 讨论 | 第49-53页 |
| 4.1 粗提物的制备 | 第49-50页 |
| 4.2 离子交换层析 | 第50页 |
| 4.3 反向高效液相色谱 | 第50-51页 |
| 4.4 质谱分析 | 第51-52页 |
| 4.5 合成抗菌肽 | 第52页 |
| 4.6 牛脾脏作为抗菌肽分离的原材料 | 第52-53页 |
| 全文结论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 攻读硕士研究生学位期间取得的研究成果 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
