| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第13-22页 |
| 1.1 植物诱导抗病性 | 第13-17页 |
| 1.1.1 植物诱导抗病性的概念 | 第13-14页 |
| 1.1.2 植物诱导抗病性的特点 | 第14-15页 |
| 1.1.3 植物诱导抗病性的应用 | 第15页 |
| 1.1.4 诱导植物抗病性的作用机制 | 第15-17页 |
| 1.2 磷酸化蛋白修饰在植物免疫调控机制中的作用 | 第17-19页 |
| 1.2.1 磷酸化蛋白质组学概述 | 第17页 |
| 1.2.2 磷酸化肽段的富集方法 | 第17-18页 |
| 1.2.3 蛋白质组学的分析方法 | 第18-19页 |
| 1.3 蛋白激发子的研究现状 | 第19页 |
| 1.4 CP家族蛋白 | 第19-21页 |
| 1.4.1 CPPs的概述 | 第19-20页 |
| 1.4.2 CPPs在真菌与植物互作时所表现的生物学功能 | 第20页 |
| 1.4.3 BcSpl1的研究背景 | 第20-21页 |
| 1.5 本研究目的和意义 | 第21页 |
| 1.6 研究技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 BcSpl1的真核表达与原核表达纯化 | 第22-38页 |
| 2.1 试验材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第22页 |
| 2.1.2 试剂与仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.3 培养基与试剂配方 | 第23-24页 |
| 2.2 试验方法 | 第24-32页 |
| 2.2.1 BcSpl1蛋白序列的分析 | 第24页 |
| 2.2.2 灰霉菌总RNA提取 | 第24-25页 |
| 2.2.3 第一链cDNA的合成 | 第25页 |
| 2.2.4 特异引物设计 | 第25页 |
| 2.2.5 目的基因的扩增 | 第25-26页 |
| 2.2.6 PCR产物与pMD18-T的连接、转化及验证 | 第26-27页 |
| 2.2.7 BcSpl1真核表达载体的构建与表达 | 第27-29页 |
| 2.2.8 BcSpl1真核表达产物的纯化与检测 | 第29页 |
| 2.2.9 BcSpl1原核表达载体的构建与蛋白表达 | 第29-31页 |
| 2.2.10 BcSpl1原核表达产物的纯化 | 第31-32页 |
| 2.2.11真核表达与原核表达重组蛋白的质谱鉴定 | 第32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-37页 |
| 2.3.1 毕赤酵母重组表达载体pPIC9K-bcspl1的构建与鉴定 | 第32-33页 |
| 2.3.2 重组蛋白的表达与纯化 | 第33-34页 |
| 2.3.3 大肠杆菌重组表达载体pET-30His-bcspl1的构建与鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.4 重组蛋白的表达与纯化 | 第35页 |
| 2.3.5 重组蛋白的质谱鉴定 | 第35-37页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第37-38页 |
| 第三章 BcSpl1诱导植物抗病性的功能鉴定 | 第38-42页 |
| 3.1 实验材料 | 第38页 |
| 3.1.1 供试植物 | 第38页 |
| 3.1.2 试剂与仪器 | 第38页 |
| 3.1.3 数据采集和数据统计方法 | 第38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-39页 |
| 3.2.1 蛋白浓度的测定 | 第38-39页 |
| 3.2.2 表达蛋白的生物活性检测 | 第39页 |
| 3.2.3 重组蛋白诱导番茄抗病性 | 第39页 |
| 3.3 结果与分析 | 第39-41页 |
| 3.3.1 真核表达的重组蛋白的生物活性检测 | 第39-40页 |
| 3.3.2 真核表达的重组蛋白诱导番茄的抗病性 | 第40页 |
| 3.3.3 原核表达的重组蛋白的生物活性检测 | 第40页 |
| 3.3.4 原核表达的重组蛋白诱导番茄的抗病性 | 第40-41页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第41-42页 |
| 第四章 BcSpl1诱导番茄抗性相关基因的转录表达 | 第42-48页 |
| 4.1 实验材料 | 第42页 |
| 4.1.1 供试植物 | 第42页 |
| 4.1.2 试剂和仪器 | 第42页 |
| 4.1.3 分析软件 | 第42页 |
| 4.2 实验方法 | 第42-44页 |
| 4.2.1 BcSpl1处理番茄叶片 | 第42-43页 |
| 4.2.2 番茄样品总RNA的提取 | 第43页 |
| 4.2.3 cDNA第一链的合成 | 第43页 |
| 4.2.4 特异引物的设计 | 第43-44页 |
| 4.2.5 qPCR目的基因的扩增 | 第44页 |
| 4.2.6 荧光定量PCR的数据分析 | 第44页 |
| 4.3 结果与分析 | 第44-47页 |
| 4.3.1 PR-1a的转录水平变化 | 第44-45页 |
| 4.3.2 Prosystemin的转录水平变化 | 第45页 |
| 4.3.3 PI I和PI II的转录水平变化 | 第45-46页 |
| 4.3.4 蛋白激酶基因SIPK与WIPK的转录水平变化 | 第46页 |
| 4.3.5 蛋白激酶基因TPK1b的转录水平变化 | 第46-47页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第47-48页 |
| 第五章 BcSpl1处理番茄叶片的磷酸化蛋白组学分析 | 第48-60页 |
| 5.1 试验材料 | 第48-49页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第48页 |
| 5.1.2 试剂与仪器 | 第48页 |
| 5.1.3 分析工具与数据库 | 第48-49页 |
| 5.2 实验方法 | 第49-50页 |
| 5.2.1 实验流程图 | 第49页 |
| 5.2.2 粗蛋白的提取 | 第49页 |
| 5.2.3 胰蛋白酶消化 | 第49-50页 |
| 5.2.4 TMT标记 | 第50页 |
| 5.2.5 磷酸化肽段的富集 | 第50页 |
| 5.2.6 LC-MS/MS分析 | 第50页 |
| 5.2.7 数据搜索 | 第50页 |
| 5.3 结果与分析 | 第50-57页 |
| 5.3.1 MS的数据质量分析 | 第50-51页 |
| 5.3.2 磷酸化肽段的综合分析 | 第51页 |
| 5.3.3 磷酸化位点motifs分析 | 第51-52页 |
| 5.3.4 motifs与功能的关系 | 第52-53页 |
| 5.3.5 锌指结构蛋白 | 第53-54页 |
| 5.3.6 蛋白激酶 | 第54-55页 |
| 5.3.7 磷酸化蛋白的GO功能分析 | 第55-56页 |
| 5.3.8 磷酸化蛋白的功能富集分析 | 第56-57页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第57-60页 |
| 第六章 全文结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简历 | 第70页 |
