| 中文摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1 JEV的病原学特性 | 第13-14页 |
| 1.1 JEV的理化特性 | 第13-14页 |
| 1.2 JEV的培养特性 | 第14页 |
| 2 JEV致病的机制 | 第14-16页 |
| 3 JEV分子生物学特性 | 第16-20页 |
| 3.1 JEV的基因组及编码蛋白 | 第16页 |
| 3.2 结构蛋白 | 第16-18页 |
| 3.3 非结构蛋白 | 第18-20页 |
| 4 乙型脑炎疫苗研究进展 | 第20-21页 |
| 5 研究目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 JEV强弱毒株非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-NS2A基因的克隆 | 第23-45页 |
| 1 材料 | 第23-26页 |
| 1.1 病毒和细胞 | 第23页 |
| 1.2 主要试剂 | 第23-24页 |
| 1.3 主要溶液的配制 | 第24-26页 |
| 2 方法 | 第26-32页 |
| 2.1 引物设计与合成 | 第26-27页 |
| 2.2 细胞接毒 | 第27页 |
| 2.3 总RNA的提取 | 第27页 |
| 2.4 RT-PCR扩增 | 第27-28页 |
| 2.5 目的基因的回收纯化 | 第28页 |
| 2.6 目的基因与pMD19-T Simple载体的连接 | 第28-29页 |
| 2.7 重组质粒的转化 | 第29-30页 |
| 2.8 菌落PCR | 第30-31页 |
| 2.9 重组质粒的抽提 | 第31页 |
| 2.10 重组质粒的酶切鉴定 | 第31-32页 |
| 3 结果 | 第32-43页 |
| 3.1 细胞接毒结果 | 第32-35页 |
| 3.2 RT-PCR产物电泳检测结果 | 第35-37页 |
| 3.3 重组质粒pMD19-T Simple菌落PCR结果 | 第37-39页 |
| 3.4 重组质粒pMD19 Simple-T酶切鉴定结果 | 第39-42页 |
| 3.5 序列测定结果 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-44页 |
| 5 结论 | 第44-45页 |
| 第三章 JEV强弱毒株非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-NS2A基因真核表达质粒的构建及生物信息学分析 | 第45-70页 |
| 1 材料 | 第45-47页 |
| 1.1 菌种 | 第45页 |
| 1.2 主要试剂 | 第45-46页 |
| 1.3 主要溶液的配制 | 第46-47页 |
| 2 方法 | 第47-48页 |
| 2.1 真核表达载体的制备 | 第47页 |
| 2.2 目的基因与真核表达载体的双酶切 | 第47页 |
| 2.3 目的基因与载体的连接 | 第47-48页 |
| 2.4 转化 | 第48页 |
| 2.5 重组质粒的酶切鉴定 | 第48页 |
| 2.6 序列测定 | 第48页 |
| 2.7 乙脑病毒强弱毒株非结构蛋白NS1，NS2A和NS1-2A基因生物信息学分析 | 第48页 |
| 3 结果 | 第48-67页 |
| 3.1 重组质粒菌落PCR结果 | 第48-51页 |
| 3.2 重组质粒pcDNA3.1(+)酶切鉴定结果 | 第51-55页 |
| 3.3 乙脑强弱毒株非结构蛋白NS1，NS2A和NS1-2A基因生物信息学分析结果 | 第55-67页 |
| 4 讨论 | 第67-68页 |
| 5 结论 | 第68-70页 |
| 第四章 JEV强弱毒株NS1、NS2A和NS1-2A基因的真核表达及其表达差异的研究 | 第70-93页 |
| 1 材料 | 第70-74页 |
| 1.1 菌种、细胞和实验动物 | 第70页 |
| 1.2 主要试剂 | 第70-71页 |
| 1.3 主要溶液的配制 | 第71-74页 |
| 2 方法 | 第74-80页 |
| 2.1 多克隆抗体的制备 | 第74页 |
| 2.2 pcDNA3.1(+)真核质粒的小量制备 | 第74-75页 |
| 2.3 真核表达质粒的转染与表达产物的检测 | 第75-76页 |
| 2.4 Triol法提取总RNA | 第76页 |
| 2.5 RT-PCR扩增 | 第76页 |
| 2.6 pcDNA3.1 真核质粒的大量制备及纯化 | 第76-77页 |
| 2.7 Western-boltting分析 | 第77-78页 |
| 2.8 动物免疫试验 | 第78-79页 |
| 2.9 真核表达质粒在小鼠体内的分布 | 第79-80页 |
| 3 结果 | 第80-89页 |
| 3.1 真核表达质粒在BHK-21 细胞中的表达 | 第80-82页 |
| 3.2 重组蛋白的Western-Blotting分析 | 第82-84页 |
| 3.3 免疫小白鼠血清IgG抗体检测结果 | 第84-86页 |
| 3.4 免疫小白鼠血常规和T淋巴细胞亚群的检测结果 | 第86-87页 |
| 3.5 真核表达质粒在小鼠体内的分布检测结果 | 第87-89页 |
| 4 讨论 | 第89-92页 |
| 5 结论 | 第92-93页 |
| 主要参考文献 | 第93-98页 |
| 附录一 攻读硕士学位期间参与发表的论文 | 第98-100页 |
| 附录二 本文用到的部分英文缩写及含义说明 | 第100-101页 |
| 附录三 流式细胞仪检测小鼠外周血CD4~+、CD8~+T淋巴细胞百分含量的部分检测结果图 | 第101-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
