| 中文摘要 | 第10-13页 |
| 英文摘要 | 第13-15页 |
| 英文缩略语表 | 第16-17页 |
| 前言 | 第17-24页 |
| 参考文献 | 第20-24页 |
| 第一部 V.vulfinicus Y066 vvhA基因的克隆表达 | 第24-36页 |
| 材料和方法 | 第24-30页 |
| 1. 材料 | 第24-26页 |
| 1.1 菌株和载体 | 第24-25页 |
| 1.2 主要试剂 | 第25页 |
| 1.3 主要溶液的配制 | 第25-26页 |
| 1.4 主要仪器 | 第26页 |
| 2. 方法 | 第26-30页 |
| 2.1 V.vulfinicusY066的培养与鉴定 | 第27页 |
| 2.2 V.vulfinicus Y066 DNA的提取 | 第27页 |
| 2.3 V.vulfinicus Y066 vvhA基因的引物设计与PCR反应 | 第27-28页 |
| 2.4 PCR产物的胶回收 | 第28页 |
| 2.5 vvhA基因的T-A连接反应 | 第28-29页 |
| 2.6 连接产物转化DH5α感受态细菌及转化子的验证 | 第29页 |
| 2.7 vvhA重组质粒的提取 | 第29-30页 |
| 2.8 vvhA重组原核表达质粒的构建和鉴定 | 第30页 |
| 结果 | 第30-32页 |
| 1.1 V.vulfinicus Y066菌株的分离培养与鉴定 | 第30-31页 |
| 1.2 vvhA基因片段PCR扩增克隆及鉴定序列分析 | 第31-32页 |
| 1.3 重组表达质粒pET28a-vvhA的构建及序列分析 | 第32页 |
| 讨论 | 第32-33页 |
| 结论 | 第33页 |
| 参考文献 | 第33-36页 |
| 第二部 V.vulfinicus Y066 VvhA蛋白的生物信息学分析 | 第36-44页 |
| 材料和方法 | 第36页 |
| 1. 方法 | 第36页 |
| 1.1 vvhA基因推导编码产物的获得 | 第36页 |
| 1.2 V.vulfinicus Y066 VvhA蛋白的生物信息学分析 | 第36页 |
| 结果 | 第36-41页 |
| 1.1 VvhA的理化特性分析 | 第37-38页 |
| 1.2 VvhA蛋白信号肽和跨膜区的预测 | 第38-39页 |
| 1.3 VvhA蛋白二级结构预测 | 第39-40页 |
| 1.4 VvhA蛋白卷曲螺旋的预测分析 | 第40页 |
| 1.5 VvhA蛋白三维结构的预测 | 第40-41页 |
| 1.6 VvhA蛋白功能结构域的预测 | 第41页 |
| 讨论 | 第41-42页 |
| 结论 | 第42页 |
| 参考文献 | 第42-44页 |
| 第三部 VvhA蛋白多克隆抗体的制备及其中和作用探讨 | 第44-55页 |
| 材料和方法 | 第44-51页 |
| 1. 材料 | 第44-47页 |
| 1.1 实验小鼠 | 第44页 |
| 1.2 主要试剂 | 第44页 |
| 1.3 主要溶液的配制 | 第44-47页 |
| 1.4 主要仪器 | 第47页 |
| 2. 方法 | 第47-51页 |
| 2.1 融合蛋白的诱导表达 | 第47-48页 |
| 2.2 重组VvhA蛋白的大量表达和纯化 | 第48-49页 |
| 2.3 纯化重组VvhA蛋白的SDS-PAGE及Western blot分析 | 第49-50页 |
| 2.4 重组VvhA蛋白多克隆抗体的制备及其效价测定 | 第50-51页 |
| 2.5 多克隆抗体的中和作用 | 第51页 |
| 结果 | 第51-53页 |
| 1.1 重组蛋白的诱导表达及鉴定 | 第51-52页 |
| 1.2 重组蛋白的纯化与抗体效价测定 | 第52页 |
| 1.3 被动免疫小鼠的存活情况 | 第52-53页 |
| 讨论 | 第53页 |
| 结论 | 第53页 |
| 参考文献 | 第53-55页 |
| 第四部 V. vulfinicus Y066 vvhA基因缺失株的构建及其免疫应答研究 | 第55-69页 |
| 材料和方法 | 第55-60页 |
| 1. 材料 | 第55-57页 |
| 1.1 载体与实验小鼠 | 第55页 |
| 1.2 主要试剂 | 第55-56页 |
| 1.3 主要溶液的配制 | 第56页 |
| 1.4 主要仪器 | 第56-57页 |
| 2. 方法 | 第57-60页 |
| 2.1 细菌的培养及电转感受态细胞的制备 | 第57页 |
| 2.2 vvhA基因上下游同源臂的扩增 | 第57-58页 |
| 2.3 重组自杀质粒的构建和鉴定 | 第58页 |
| 2.4 vvhA基因缺失株的构建和鉴定 | 第58-59页 |
| 2.5 腹腔注射感染Balb/c小鼠Th1/Th2亚群的免疫应答 | 第59-60页 |
| 2.6 IFN-γ的含量检测 | 第60页 |
| 2.7 组织病理学及血清学检测 | 第60页 |
| 2.8 统计学分析 | 第60页 |
| 结果 | 第60-65页 |
| 1.1 vvhA基因上下游同源臂的PCR扩增 | 第60-61页 |
| 1.2 vvhA基因缺失重组自杀质粒的构建 | 第61-62页 |
| 1.3 vvhA基因缺失株的鉴定 | 第62页 |
| 1.4 Balb/c小鼠Th1/Th2亚群的含量变化 | 第62-63页 |
| 1.5 IFN-γ的表达情况 | 第63-64页 |
| 1.6 小鼠肝脏的组织病理学检测 | 第64-65页 |
| 1.7 血清肝功能指标检测 | 第65页 |
| 讨论 | 第65-66页 |
| 结论 | 第66页 |
| 参考文献 | 第66-69页 |
| 综述 | 第69-78页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 攻读学位期间发表文章情况 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
