| 中文摘要 | 第3-5页 |
| 英文摘要 | 第5-6页 |
| 1 绪论 | 第9-18页 |
| 1.1 课题背景 | 第9-11页 |
| 1.2 影响酶热稳定性的机制及其研究策略进展 | 第11-15页 |
| 1.2.1 蛋白质热稳定性的概念 | 第11-12页 |
| 1.2.2 蛋白质热稳定性的相关因素 | 第12页 |
| 1.2.3 盐桥对蛋白质热稳定性影响的研究现状 | 第12-13页 |
| 1.2.4 蛋白质热稳定性研究策略 | 第13-14页 |
| 1.2.5 分子动力学模拟与Amber简介 | 第14-15页 |
| 1.3 课题的提出 | 第15-16页 |
| 1.4 主要研究内容 | 第16-17页 |
| 1.5 技术路线 | 第17-18页 |
| 2 盐桥突变对CA 7ɑ-HSDH热稳定性影响的实验研究 | 第18-41页 |
| 2.1 本章引言 | 第18-19页 |
| 2.2 盐桥突变位点的确定 | 第19页 |
| 2.3 主要试验仪器与材料 | 第19-22页 |
| 2.3.1 相关仪器 | 第19-20页 |
| 2.3.2 质粒与菌株 | 第20-21页 |
| 2.3.3 工具酶与试剂 | 第21页 |
| 2.3.4 培养基配制及相关配制溶液 | 第21-22页 |
| 2.4 CA 7ɑ-HSDH盐桥突变试验操作 | 第22-29页 |
| 2.4.1 突变质粒引物设计 | 第22-23页 |
| 2.4.2 重叠延伸PCR程序 | 第23-26页 |
| 2.4.3 重组质粒构建 | 第26-27页 |
| 2.4.4 重组质粒的表达 | 第27-28页 |
| 2.4.5 重组酶蛋白酶学性质检测 | 第28-29页 |
| 2.5 结果与讨论 | 第29-34页 |
| 2.5.1 VMD盐桥分析结果 | 第29页 |
| 2.5.2 稳定盐桥与突变位点的确定 | 第29-32页 |
| 2.5.3 盐桥定点突变区域的扩增 | 第32页 |
| 2.5.4 重组质粒双酶切验证转化结果 | 第32-33页 |
| 2.5.5 重组质粒基因测序验证 | 第33页 |
| 2.5.6 突变酶的表达与纯化 | 第33-34页 |
| 2.6 重组酶蛋白酶学性质检测与对比 | 第34-40页 |
| 2.6.1 突变酶与野生型酶最适温度检测 | 第34-36页 |
| 2.6.2 突变酶与野生酶的热稳定性检测 | 第36-39页 |
| 2.6.3 突变酶与野生酶t1/2测定 | 第39页 |
| 2.6.4 突变酶与野生酶Tm值测定 | 第39-40页 |
| 2.7 本章小结 | 第40-41页 |
| 3 盐桥突变对CA 7ɑ-HSDH热稳定性影响的理论研究 | 第41-54页 |
| 3.1 本章引言 | 第41页 |
| 3.2 分子动力学模拟思路图 | 第41页 |
| 3.3 软件与设备 | 第41-42页 |
| 3.4 野生型与盐桥突变型CA 7ɑ-HSDH不同温度的MD模拟 | 第42-43页 |
| 3.4.1 单亚基蛋白结构的获取 | 第42页 |
| 3.4.2 虚拟突变体的获取与分子优化处理 | 第42页 |
| 3.4.3 辅酶与底物分子获取 | 第42页 |
| 3.4.4 分子动力学模拟过程及参数设置 | 第42-43页 |
| 3.4.5 轨迹分析 | 第43页 |
| 3.5 结果与讨论 | 第43-53页 |
| 3.5.1 轨迹文件分析 | 第43-50页 |
| 3.5.2 320K突变体系模拟结果分析 | 第50-53页 |
| 3.6 本章小结 | 第53-54页 |
| 4 全文结论 | 第54-56页 |
| 5 后续工作建议 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 附录 | 第64页 |
| A. 作者在攻读硕士学位期间参研的科研项目 | 第64页 |
