| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略语/符号说明 | 第13-14页 |
| 前言 | 第14-32页 |
| 研究现状、成果 | 第14-30页 |
| 研究目的、方法 | 第30-32页 |
| 一、miR-709 在肝癌细胞系和肝癌标本中的表达 | 第32-47页 |
| 1.1 对象和方法 | 第32-40页 |
| 1.1.1 主要仪器 | 第32-33页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第33-34页 |
| 1.1.3 引物 | 第34页 |
| 1.1.4 细胞 | 第34页 |
| 1.1.5 肝癌标本 | 第34-36页 |
| 1.1.6 细胞培养 | 第36页 |
| 1.1.7 细胞株的冻存 | 第36-37页 |
| 1.1.8 冻存细胞的复苏 | 第37页 |
| 1.1.9 细胞总RNA提取 | 第37-38页 |
| 1.1.10 组织标本总RNA提取 | 第38页 |
| 1.1.11 反转录生成cDNA | 第38-39页 |
| 1.1.12 实时定量PCR | 第39页 |
| 1.1.13 统计学处理 | 第39-40页 |
| 1.2 结果 | 第40-44页 |
| 1.2.1 miR-709 在不同肝癌细胞和正常肝脏细胞中的表达情况 | 第40页 |
| 1.2.2 初步筛查miR-709 在肝癌组织和癌旁正常组织中的表达情况 | 第40-41页 |
| 1.2.3 进一步验证miR-709 在病人肝癌组织和癌旁正常组织中的相对表达量有差异 | 第41-42页 |
| 1.2.4 进一步研究miR-709 的表达水平与肝癌的临床病理特征的相关性分析 | 第42-44页 |
| 1.3 讨论 | 第44-46页 |
| 1.4 小结 | 第46-47页 |
| 二、miR-709 对肝癌细胞HepG2的生物学功能 | 第47-69页 |
| 2.1 对象和方法 | 第47-58页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第47-48页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第48-49页 |
| 2.1.3 细胞 | 第49页 |
| 2.1.4 miR-709 的模拟物 | 第49页 |
| 2.1.5 细胞培养 | 第49-50页 |
| 2.1.6 细胞株的冻存 | 第50页 |
| 2.1.7 冻存细胞的复苏 | 第50-51页 |
| 2.1.8 质粒的小量提取 | 第51页 |
| 2.1.9 质粒的纯化和定量 | 第51页 |
| 2.1.10 细胞基因组提取 | 第51-52页 |
| 2.1.11 基因的转染 | 第52-53页 |
| 2.1.12 细胞总RNA提取 | 第53-54页 |
| 2.1.13 反转录生成cDNA | 第54页 |
| 2.1.14 荧光素酶报告基因实验 | 第54-55页 |
| 2.1.15 Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测细胞增殖 | 第55页 |
| 2.1.16 细胞划痕实验 | 第55-56页 |
| 2.1.17 Transwel实验 | 第56页 |
| 2.1.18 实时定量PCR法 | 第56-57页 |
| 2.1.19 Western blot | 第57-58页 |
| 2.1.20 统计学分析 | 第58页 |
| 2.2 结果 | 第58-65页 |
| 2.2.1 转染miR-709 inhibitor后HepG2肝癌细胞系中miR-709 的表达情况 | 第58-59页 |
| 2.2.2 转染miR-709 mimic后HepG2肝癌细胞系中miR-709 的表达情况 | 第59页 |
| 2.2.3 转染miR-709 inhibitor后HepG2肝癌细胞增殖情况 | 第59-60页 |
| 2.2.4 转染miR-709 mimic后HepG2肝癌细胞增殖情况 | 第60-61页 |
| 2.2.5 Ki-67 mRNA在转染的肝癌细胞系中的表达情况 | 第61-62页 |
| 2.2.6 Ki-67 蛋白在转染的肝癌细胞系中的表达情况 | 第62-63页 |
| 2.2.7 miR-709 inhibitor和miR-709 mimic对肝癌细胞HepG2迁移能力的影响 | 第63-65页 |
| 2.3 讨论 | 第65-68页 |
| 2.4 小结 | 第68-69页 |
| 三、miR-709 靶基因的预测和鉴定 | 第69-90页 |
| 3.1 对象和方法 | 第69-82页 |
| 3.1.1 主要仪器 | 第69-70页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第70-71页 |
| 3.1.3 细胞 | 第71页 |
| 3.1.4 PCR引物 | 第71页 |
| 3.1.5 miRNA mimic序列 | 第71页 |
| 3.1.6 miR-709 靶基因的生物信息学预测和分析 | 第71-72页 |
| 3.1.7 细胞培养 | 第72页 |
| 3.1.8 细胞株的冻存 | 第72-73页 |
| 3.1.9 冻存细胞的复苏 | 第73页 |
| 3.1.10 质粒的小量提取 | 第73页 |
| 3.1.11 质粒的纯化和定量 | 第73-74页 |
| 3.1.12 细胞基因组提取 | 第74页 |
| 3.1.13 重组质粒pT-GPC5标准品的制备 | 第74-76页 |
| 3.1.14 基因的转染 | 第76-77页 |
| 3.1.15 细胞总RNA提取 | 第77-78页 |
| 3.1.16 反转录生成cDNA | 第78页 |
| 3.1.17 实时定量PCR法 | 第78-79页 |
| 3.1.18 Western blot | 第79-80页 |
| 3.1.19 GPC5靶基因报告基因质粒的构建 | 第80页 |
| 3.1.20 荧光素酶报告基因实验 | 第80-81页 |
| 3.1.21 CCK-8 法检测细胞增殖 | 第81页 |
| 3.1.22 Transwel实验 | 第81-82页 |
| 3.1.23 统计分析 | 第82页 |
| 3.2 结果 | 第82-87页 |
| 3.2.1 miR-709 靶基因的生物信息学分析 | 第82页 |
| 3.2.2 双萤光素酶报告、RT-PCR和Western blot证明GPC5是miR-709 的靶基因 | 第82-84页 |
| 3.2.3 GPC5和miR-709 对肝癌细胞的增殖及侵袭能力的影响 | 第84-87页 |
| 3.3 讨论 | 第87-89页 |
| 3.4 小结 | 第89-90页 |
| 全文结论 | 第90-91页 |
| 论文创新点 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-101页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第101-102页 |
| 综述 miRNA在肝癌中的研究进展 | 第102-127页 |
| 综述参考文献 | 第117-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
| 个人简历 | 第128页 |
