| 摘要 | 第5-9页 |
| Abstract | 第9-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-26页 |
| 1.1 AGL24花期调控的分子机制 | 第14页 |
| 1.2 AGL24对花发育的调控 | 第14-16页 |
| 1.3 芥菜AGL24在春化途径、光周期途径以及自主途径中的表达 | 第16页 |
| 1.4 AGL24在开花调控网络中的上位性关系 | 第16-22页 |
| 1.4.1 AGL24与SOC1相互调控 | 第16-17页 |
| 1.4.2 AGL24与SVP功能差异 | 第17-18页 |
| 1.4.3 AGL24受AP1调控 | 第18-19页 |
| 1.4.4 AGL24调控TFL1的表达 | 第19-20页 |
| 1.4.5 AGL24抑制B类、C类花器官基因 | 第20-22页 |
| 1.5 研究蛋白相互作用的方法 | 第22-26页 |
| 1.5.1 酵母双杂交系统 | 第23页 |
| 1.5.2 双分子荧光互补技术 | 第23-26页 |
| 第二章 引言 | 第26-28页 |
| 第三章 芥菜开花整合子AGL24与SVP、FLC蛋白互作检测 | 第28-48页 |
| 3.1 材料 | 第28-29页 |
| 3.1.1 菌种及载体 | 第28页 |
| 3.1.2 试验试剂 | 第28-29页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第29页 |
| 3.2 方法 | 第29-38页 |
| 3.2.1 试验试剂的配制 | 第29-30页 |
| 3.2.2 PCR产物回收 | 第30页 |
| 3.2.3 目的片段的连接及转化 | 第30-31页 |
| 3.2.4 重组质粒的提取 | 第31页 |
| 3.2.5 阳性克隆的确定 | 第31-32页 |
| 3.2.6 生物信息学分析 | 第32页 |
| 3.2.7 引物设计 | 第32-34页 |
| 3.2.8 酵母感受态细胞的制备 | 第34页 |
| 3.2.9 农杆菌(GV3101)感受态细胞的制备 | 第34页 |
| 3.2.10 酵母感受态细胞的转化(醋酸锂转化法,LiAc法) | 第34-35页 |
| 3.2.11 农杆菌转化(冷热刺激法) | 第35页 |
| 3.2.12 芥菜AGL24及AGL24去M域截短体基因序列的特异性扩增 | 第35-36页 |
| 3.2.13 酵母双杂交检测AGL24及其去M域截短体与FLC、SVP蛋白互作 | 第36-37页 |
| 3.2.14 BiFC技术检测AGL24以及其去M域截短体与FLC及SVP蛋白互作 | 第37-38页 |
| 3.3 结果与分析 | 第38-48页 |
| 3.3.1 芥菜AGL24的克隆及其蛋白结构分析 | 第38-41页 |
| 3.3.2 酵母表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 3.3.3 毒性与自激活检测 | 第42-43页 |
| 3.3.4 BiFC表达载体的构建 | 第43-44页 |
| 3.3.5 蛋白相互作用鉴定 | 第44-48页 |
| 第四章 芥菜AGL24与SOC1蛋白互作鉴定 | 第48-56页 |
| 4.1 材料 | 第48页 |
| 4.2 方法 | 第48-50页 |
| 4.2.1 试验试剂的配制 | 第48页 |
| 4.2.2 SOC1及SOC1去M域截短体特异性扩增 | 第48页 |
| 4.2.3 SOC1及SOC1去M域截短体酵母重组质粒的构建 | 第48-49页 |
| 4.2.4 SOC1及SOC1去M域截短体BiFC重组质粒的构建 | 第49页 |
| 4.2.5 蛋白相互作用的鉴定 | 第49-50页 |
| 4.2.6 蛋白相互作用强度分析 | 第50页 |
| 4.3 结果分析 | 第50-56页 |
| 4.3.1 酵母双杂交系统鉴定芥菜AGL24与SOC1蛋白互作 | 第51-53页 |
| 4.3.2 BiFC技术鉴定芥菜AGL24与SOC1蛋白互作 | 第53-54页 |
| 4.3.3 芥菜AGL24与SOC1互作强度分析 | 第54-56页 |
| 第五章 AGL24与SOC1蛋白互作关键氨基酸位点筛选 | 第56-68页 |
| 5.1 材料 | 第56页 |
| 5.2 方法 | 第56-59页 |
| 5.2.1 AGL24蛋白互作位点在线预测 | 第56页 |
| 5.2.2 基因AGL24突变体的构建 | 第56-57页 |
| 5.2.3 AGL24蛋白突变体重组质粒的构建 | 第57-58页 |
| 5.2.4 酵母双杂交系统鉴定蛋白互作 | 第58-59页 |
| 5.2.5 双分子荧光互补技术(BiFC)鉴定蛋白互作 | 第59页 |
| 5.3 结果与分析 | 第59-68页 |
| 5.3.1 基因AGL24突变体的构建 | 第59-60页 |
| 5.3.2 突变体重组质粒的鉴定 | 第60-62页 |
| 5.3.3 AGL24突变体与SOC1蛋白互作 | 第62-64页 |
| 5.3.4 SOC1突变体与AGL24蛋白的互作 | 第64-68页 |
| 第六章 讨论 | 第68-70页 |
| 第七章 结论 | 第70-72页 |
| 7.1 成功克隆了芥菜AGL24基因 | 第70页 |
| 7.2 芥菜AGL24与SVP、FLC均不能产生蛋白互作 | 第70页 |
| 7.3 芥菜AGL24与SOC1能够相互作用 | 第70页 |
| 7.4 获得芥菜AGL24参与蛋白互作的关键氨基酸预测位点 | 第70页 |
| 7.5 芥菜AGL24与SOC1互作位点鉴定 | 第70-71页 |
| 7.6 芥菜SOC1与AGL24互作位点的鉴定 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-76页 |
| 附录 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78-80页 |
| 项目资助 | 第80-82页 |
| 在校期间发表论文 | 第82页 |
