| 摘要 | 第5-7页 |
| ABTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-38页 |
| 1.1 稻瘟菌的生活史和侵染循环 | 第14-18页 |
| 1.2 稻瘟菌重要信号通路研究进展 | 第18-28页 |
| 1.2.1 异源三聚体G蛋白信号通路 | 第20-23页 |
| 1.2.2 Pmk1信号通路 | 第23-26页 |
| 1.2.3 Mps1信号通路 | 第26-27页 |
| 1.2.4 Osm1信号通路 | 第27页 |
| 1.2.5 三条MAPK信号通路之间存在交互作用 | 第27-28页 |
| 1.3 稻瘟菌效应因子研究进展 | 第28-29页 |
| 1.4 信号黏蛋白研究进展 | 第29-34页 |
| 1.5 MoMsb2基因研究进展 | 第34-35页 |
| 1.6 Wor1基因研究进展 | 第35-36页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第36-38页 |
| 第二章 材料与方法 | 第38-57页 |
| 2.1 试验材料 | 第38-42页 |
| 2.1.1 质粒载体 | 第38页 |
| 2.1.2 供试菌株 | 第38页 |
| 2.1.3 供试植物 | 第38页 |
| 2.1.4 试剂 | 第38-39页 |
| 2.1.5 溶液配方 | 第39-42页 |
| 2.1.6 培养基 | 第42页 |
| 2.2 试验方法 | 第42-57页 |
| 2.2.1 稻瘟菌基因组DNA的提取 | 第42-43页 |
| 2.2.1.1 稻瘟菌基因组DNA快速提取 | 第42页 |
| 2.1.1.2 CTAB法提取稻瘟菌基因组DNA | 第42-43页 |
| 2.2.2 PCR反应 | 第43-46页 |
| 2.2.2.1 常规PCR反应 | 第43页 |
| 2.2.2.2 PCR产物胶回收纯化 | 第43-44页 |
| 2.2.2.3 Double joint PCR | 第44-45页 |
| 2.2.2.4 菌落PCR | 第45-46页 |
| 2.2.3 质粒操作 | 第46-47页 |
| 2.2.3.1 大肠杆菌质粒提取 | 第46页 |
| 2.2.3.2 质粒酶切体系 | 第46页 |
| 2.2.3.3 DNA片断的凝胶回收 | 第46页 |
| 2.2.3.4 大肠杆菌电击感受态的制备（低盐） | 第46-47页 |
| 2.2.3.5 大肠杆菌质粒的电击转化 | 第47页 |
| 2.2.4 酵母菌操作 | 第47页 |
| 2.2.4.1 酵母转化 | 第47页 |
| 2.2.4.2 酵母质粒快速提取 | 第47页 |
| 2.2.5 稻瘟菌原生质体转化 | 第47-48页 |
| 2.2.6 地高辛标记southern杂交 | 第48-50页 |
| 2.2.6.1 地高辛标记DNA | 第48-49页 |
| 2.2.6.2 杂交 | 第49页 |
| 2.2.6.3 免疫检测（100 cm2膜） | 第49-50页 |
| 2.2.6.4 DNA印记的洗脱和再次探针杂交 | 第50页 |
| 2.2.7 稻瘟菌表型观察 | 第50-53页 |
| 2.2.7.1 稻瘟菌的产孢和保存 | 第50页 |
| 2.2.7.2 稻瘟菌菌落形态观察 | 第50页 |
| 2.2.7.3 稻瘟菌产孢率测定 | 第50-51页 |
| 2.2.7.4 附着胞形成试验 | 第51页 |
| 2.2.7.5 水稻喷雾接种 | 第51页 |
| 2.2.7.6 大麦叶片喷雾接种 | 第51-52页 |
| 2.2.7.7 水稻叶片穿刺接种 | 第52页 |
| 2.2.7.8 水稻叶鞘穿透试验 | 第52页 |
| 2.2.7.9 大麦叶片穿透试验 | 第52-53页 |
| 2.2.8 稻瘟菌蛋白操作 | 第53-57页 |
| 2.2.8.1 稻瘟菌膜蛋白提取 | 第53页 |
| 2.2.8.2 稻瘟菌总蛋白提取 | 第53-54页 |
| 2.2.8.3 蛋白质亲和纯化 | 第54页 |
| 2.2.8.4 SDS-PAGE蛋白电泳 | 第54-56页 |
| 2.2.8.5 Western Blot蛋白分析 | 第56-57页 |
| 第三章 MoMsb2的激活机制以及其与Cbp1的关系 | 第57-90页 |
| 3.1 结果与分析 | 第57-87页 |
| 3.1.1 稻瘟菌Mo Msb2基因的生物信息学分析 | 第57-60页 |
| 3.1.2 MoMsb2亚细胞定位 | 第60-62页 |
| 3.1.2.1 RP27-MSB2-GFP载体的构建 | 第60页 |
| 3.1.2.2 Momsb2/RP27-MSB2-GFP转化子的获得 | 第60-61页 |
| 3.1.2.3 附着胞中Msb2-GFP亚细胞定位观察 | 第61-62页 |
| 3.1.3 MoMsb2基因TM和CD结构域功能分析 | 第62-65页 |
| 3.1.3.1 MoMSB2DCD和MoMSB2DTM载体的构建及转化子的获得 | 第62页 |
| 3.1.3.2 CD和TM的缺失导致附着胞形成下降 | 第62-63页 |
| 3.1.3.3 CD和TM的缺失导致致病力下降 | 第63-64页 |
| 3.1.3.4 CD的缺失会阻止MoMsb2蛋白的切割 | 第64-65页 |
| 3.1.4 切割位点的鉴定 | 第65-68页 |
| 3.1.4.1 切割位点的预测 | 第65-66页 |
| 3.1.4.2 切割位点突变载体的构建以及转化子的获得 | 第66页 |
| 3.1.4.3 五个切割位点的点突变并不影响致病性 | 第66-67页 |
| 3.1.4.4 MoMsb2切割位点的Western Blot检测 | 第67-68页 |
| 3.1.5 MoMsb2胞质尾巴功能 | 第68-76页 |
| 3.1.5.1 MoMSB2DWCT-GFP载体的构建和转化子的获得 | 第68-69页 |
| 3.1.5.2 WCT区域的缺失会显著降低其致病力 | 第69-70页 |
| 3.1.5.3 WCT区域对附着胞形成不是必需的 | 第70-71页 |
| 3.1.5.4 WCT区域的缺失会显著降低附着胞的穿透率和侵染菌丝的生长 | 第71-72页 |
| 3.1.5.5 WCT原位敲除突变体的构建 | 第72页 |
| 3.1.5.6 WCT原位敲除突变体的表型分析 | 第72-74页 |
| 3.1.5.7 Momsb2/WCT-3×FLAG和Momsb2/TM-WCT-3×FLAG转化子的获得 | 第74-75页 |
| 3.1.5.8 单独表达WCT或者TM-WCT不能够恢复Momsb2突变体的表型 | 第75-76页 |
| 3.1.6 MoMsb2互作蛋白鉴定 | 第76-78页 |
| 3.1.6.1 RAS2-S-Tag、MoCDC42-S-Tag载体的构建以及相关转化子的获得 | 第77页 |
| 3.1.6.2 MoMsb2与Ras2互作但是MoMsb2与Mo Cdc42不互作 | 第77-78页 |
| 3.1.7 Msb2与Cbp1功能关系 | 第78-87页 |
| 3.1.7.1 cbp1和Momsb2 cbp1突变体的获得 | 第78-79页 |
| 3.1.7.2 Momsb2 cbp1双敲突变体孢子和菌落形态 | 第79-80页 |
| 3.1.7.3 Momsb2 cbp1双敲突变体完全丧失致病性 | 第80-82页 |
| 3.1.7.4 MoMSB2和CBP1基因的同时缺失严重抑制附着胞的形成 | 第82-83页 |
| 3.1.7.5 MoMSB2和CBP1的同时缺失会完全阻止Pmk1的磷酸化 | 第83-84页 |
| 3.1.7.6 双分子荧光互补技术检测MoMsb2与Cbp1的互作 | 第84-87页 |
| 3.2 讨论 | 第87-90页 |
| 3.2.1 CD和TM结构域的功能 | 第87页 |
| 3.2.2 MoMsb2可能存在多个切割位点 | 第87页 |
| 3.2.3 MoMSB2胞外部分与胞质尾巴的功能 | 第87-88页 |
| 3.2.4 MoMsb2与Ras2互作 | 第88-89页 |
| 3.2.5 MoMsb2与Cbp1的关系 | 第89-90页 |
| 第四章 致病性相关转录因子MoWor1功能研究 | 第90-107页 |
| 4.1 结果与分析 | 第90-105页 |
| 4.1.1 Mowor1突变体表型观察 | 第90-94页 |
| 4.1.1.1 Mowor1突变体丧失致病力 | 第90-91页 |
| 4.1.1.2 Mowor1突变体附着胞形成推迟 | 第91-92页 |
| 4.1.1.3 Mowor1突变体附着胞膨压正常 | 第92页 |
| 4.1.1.4 Mowor1 突变体不能诱导洋葱表皮产生自发荧光物质 | 第92-93页 |
| 4.1.1.5 Mowor1突变体产生不正常的侵染菌丝 | 第93-94页 |
| 4.1.2 Mo Wor1定位于细胞核 | 第94-96页 |
| 4.1.3 MoWOR1的表达受到Mps1的调节而与Pmk1无关 | 第96-99页 |
| 4.1.3.1 MoWor1在mps1突变体中表达量下降，在pmk1突变体中无明显变化 | 第96-97页 |
| 4.1.3.2 Mowor1突变体对SDS和细胞壁裂解酶高度敏感 | 第97-98页 |
| 4.1.3.3 MoWor1中发现一个假定MAPK停泊位点 | 第98-99页 |
| 4.1.4 保守的PKA激活位点对于MoWor1转录活性很重要 | 第99-101页 |
| 4.1.4.1 MoWor1中PKA磷酸化位点十分保守，但其缺失并不影响MoWor1的核定位 | 第99页 |
| 4.1.4.2 MoWor1中PKA磷酸化位点的突变不影响产孢和附着胞形成，但是会显著降低致病力 | 第99-101页 |
| 4.1.5 MoWor1中假定的CDK磷酸化位点S77功能 | 第101-103页 |
| 4.1.5.1 CDK磷酸化位点S77A点突变不影响不影响产孢，但会显著降低致病力 | 第101页 |
| 4.1.5.2 CDK磷酸化位点S77A点突变会影响MoWor1在附着胞形成后期以及侵染菌丝中的表达 | 第101-103页 |
| 4.1.6 MoWor1在植物侵染过程调控效应因子的表达 | 第103-105页 |
| 4.1.6.1 实时荧光定量显示MoWOR1基因的缺失会影响大量效应因子的表达 | 第103页 |
| 4.1.6.2 荧光显微镜观测显示效应因子蛋白Bas1和Bas4不能在Mowor1突变体中表达 | 第103-105页 |
| 4.2 讨 论 | 第105-107页 |
| 第五章 全文总结和后续研究展望 | 第107-111页 |
| 5.1 MoMsb2部分总结 | 第107-108页 |
| 5.2 MoWor1部分总结 | 第108-109页 |
| 5.3 后续研究展望 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-120页 |
| 附录 | 第120-123页 |
| 缩略词 | 第123-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
| 作者简介 | 第125页 |
