| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1.1 雷公藤活性次生代谢产物研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2 雷公藤离体培养研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2.1 植物离体培养的意义 | 第14-15页 |
| 1.2.2 雷公藤离体培养研究进展 | 第15页 |
| 1.3 雷公藤萜类物质生物合成途径 | 第15-20页 |
| 1.3.1 MVA途径和MEP途径研究进展 | 第15-17页 |
| 1.3.2 HMGR和DXR基因研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3.3 雷公藤萜类物质合成途径研究进展 | 第18-20页 |
| 1.4 RNAi的研究与应用 | 第20-22页 |
| 1.4.1 RNAi的作用机制与特点 | 第20页 |
| 1.4.2 RNAi在植物基因功能研究的应用 | 第20-21页 |
| 1.4.3 RNAi在植物次生代谢产物积累方面的应用 | 第21页 |
| 1.4.4 Gateway在RNAi中的应用 | 第21-22页 |
| 1.5 发根农杆菌介导的遗传转化 | 第22-23页 |
| 1.6 选题依据与研究思路 | 第23-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-37页 |
| 2.1 试验材料和试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第25页 |
| 2.1.2 供试试剂 | 第25页 |
| 2.1.3 供试菌种 | 第25页 |
| 2.1.4 有关培养基及所需试剂的配制 | 第25-26页 |
| 2.1.5 仪器设备 | 第26页 |
| 2.2 试验方法 | 第26-37页 |
| 2.2.1 RNA的提取和cDNA的合成 | 第26-28页 |
| 2.2.2 目的基因片段的PCR | 第28-30页 |
| 2.2.3 入门载体构建 | 第30-31页 |
| 2.2.4 表达载体构建 | 第31页 |
| 2.2.5 农杆菌转化 | 第31-32页 |
| 2.2.6 农杆菌介导法转化雷公藤 | 第32-33页 |
| 2.2.7 转基因发状根鉴定 | 第33页 |
| 2.2.8 转基因发状根表达差异分析 | 第33-35页 |
| 2.2.9 转基因发状根三种萜类化合物含量检测 | 第35-37页 |
| 第三章 结果与分析 | 第37-45页 |
| 3.1 RNA的质量检测 | 第37页 |
| 3.2 目的基因attB片段的获得 | 第37-38页 |
| 3.3 入门载体的验证 | 第38页 |
| 3.4 表达载体的验证 | 第38-39页 |
| 3.5 转基因农杆菌PCR鉴定 | 第39-40页 |
| 3.6 卡那霉素抗性筛选 | 第40页 |
| 3.7 转基因发状根PCR鉴定 | 第40-41页 |
| 3.8 转基因发状根红色荧光蛋白检测 | 第41-42页 |
| 3.9 表达差异分析结果 | 第42-43页 |
| 3.10三种萜类活性物质的含量测定结果 | 第43-45页 |
| 第四章 问题与讨论 | 第45-48页 |
| 4.1 外植体选择及转化条件的影响 | 第45页 |
| 4.2 DsRed荧光蛋白在转基因鉴定中的应用 | 第45页 |
| 4.3 Gateway+RNAi技术研究雷公藤萜类物质生物合成途径的可行性 | 第45-46页 |
| 4.4 HMGR与DXR基因表达对雷公藤萜类物质生物合成的影响 | 第46页 |
| 4.5 RNAi沉默上游基因对下游产物的影响 | 第46-47页 |
| 4.6 研究存在问题及下一步研究计划 | 第47-48页 |
| 第五章 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 附图 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-58页 |
| 个人简历 | 第58页 |
