| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语索引 | 第18-20页 |
| 第一章 绪论 | 第20-28页 |
| 1.1 食管癌 | 第20-21页 |
| 1.1.1 食管癌概述 | 第20页 |
| 1.1.2 食管癌的病因 | 第20-21页 |
| 1.1.3 食管癌的临床表现 | 第21页 |
| 1.2 miRNAs | 第21-24页 |
| 1.2.1 miRNAs简介 | 第21-22页 |
| 1.2.2 miRNAs的生物合成 | 第22-23页 |
| 1.2.3 miRNAs的作用机制 | 第23-24页 |
| 1.3 miRNAs在肿瘤中作用 | 第24-26页 |
| 1.3.1 miRNAs在肿瘤细胞增殖中的作用 | 第24页 |
| 1.3.2 miRNAs在肿瘤细胞侵袭和转移中的作用 | 第24-25页 |
| 1.3.3 miRNAs与肿瘤早期诊断和预后的关系 | 第25-26页 |
| 1.4 研究的目的和意义 | 第26-28页 |
| 第二章 MiR-99a在食管鳞癌中的作用及其调控机制研究 | 第28-60页 |
| 2.1 引言 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方案和技术路线 | 第29-31页 |
| 2.2.1 实验方案 | 第29-30页 |
| 2.2.2 技术路线 | 第30-31页 |
| 2.3 实验材料 | 第31-40页 |
| 2.3.1 实验细胞 | 第31-32页 |
| 2.3.2 实验试剂 | 第32-34页 |
| 2.3.3 siRNA靶序列和PCR引物 | 第34-35页 |
| 2.3.4 实验仪器设备 | 第35-36页 |
| 2.3.5 主要溶液的配制 | 第36-40页 |
| 2.4 实验方法 | 第40-47页 |
| 2.4.1 细胞培养 | 第40页 |
| 2.4.2 脂质体转染细胞 | 第40-41页 |
| 2.4.3 CCK-8检测细胞增殖 | 第41页 |
| 2.4.4 Transwell检测细胞迁移实验 | 第41-42页 |
| 2.4.5 细胞侵袭实验 | 第42页 |
| 2.4.6 细胞中总RNA提取 | 第42页 |
| 2.4.7 RNA逆转录 | 第42-44页 |
| 2.4.8 实时定量PCR (RT-PCR)检测 | 第44页 |
| 2.4.9 细胞中总蛋白的提取和浓度测定 | 第44-45页 |
| 2.4.10 蛋白免疫印迹 | 第45-46页 |
| 2.4.11 数据统计学分析 | 第46-47页 |
| 2.5 实验结果 | 第47-56页 |
| 2.5.1 miR-99a在食管鳞癌组织中低表达 | 第47-48页 |
| 2.5.2 miR-99a通过下调细胞周期蛋白的mRNA水平抑制食管鳞癌细胞的增殖 | 第48-49页 |
| 2.5.3 miR-99a通过抑制Slug诱导的EMT和MMPs分子的表达从而抑制食管鳞癌细胞的迁移和侵袭 | 第49-52页 |
| 2.5.4 miR-99a负调节IGF1R信号通路 | 第52-53页 |
| 2.5.5 miR-99a通过负调控IGF1R信号通路从而抑制食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭 | 第53-56页 |
| 2.6 总结与讨论 | 第56-60页 |
| 第三章 MiR-1470在食管鳞癌中的作用及其调控机制研究 | 第60-72页 |
| 3.1 引言 | 第60页 |
| 3.2 实验方案与技术路线 | 第60-61页 |
| 3.2.1 实验方案 | 第60-61页 |
| 3.2.2 技术路线 | 第61页 |
| 3.3 实验材料 | 第61-63页 |
| 3.3.1 实验细胞 | 第61页 |
| 3.3.2 实验试剂 | 第61-62页 |
| 3.3.3 siRNA靶序列和PCR引物 | 第62-63页 |
| 3.3.4 实验仪器设备 | 第63页 |
| 3.3.5 主要溶液的配制 | 第63页 |
| 3.4 实验方法 | 第63-65页 |
| 3.4.1 miR-1470逆转录 | 第63-64页 |
| 3.4.2 miR-1470实时定量PCR检测 | 第64页 |
| 3.4.3 β-半乳糖苷酶检测细胞衰老 | 第64-65页 |
| 3.5 结果与分析 | 第65-69页 |
| 3.5.1 miR-1470在食管鳞癌组织中高表达 | 第65页 |
| 3.5.2 敲降miR-1470的表达可以通过下调细胞周期蛋白的mRNA水平抑制食管鳞癌细胞的增殖 | 第65-67页 |
| 3.5.3 敲降miR-1470的表达可以通过下调MMPs分子抑制食管鳞癌细胞的迁移 | 第67-68页 |
| 3.5.4 敲降miR-1470可以诱导食管鳞癌细胞衰老和激活细胞凋亡信号通路 | 第68-69页 |
| 3.6 小结与讨论 | 第69-72页 |
| 第四章 MiR-145在食管鳞癌中的作用及其调控机制研究 | 第72-98页 |
| 4.1 引言 | 第72-73页 |
| 4.2 实验方案和技术路线 | 第73-77页 |
| 4.2.1 实验方案 | 第73-74页 |
| 4.2.2 技术路线 | 第74-77页 |
| 4.3 实验材料 | 第77-79页 |
| 4.3.1 实验细胞 | 第77-78页 |
| 4.3.2 实验试剂 | 第78页 |
| 4.3.3 siRNA靶序列和PCR引物 | 第78-79页 |
| 4.3.4 实验仪器设备 | 第79页 |
| 4.3.5 主要溶液的配制 | 第79页 |
| 4.4 实验方法 | 第79-81页 |
| 4.4.1 miR-145逆转录 | 第79-80页 |
| 4.4.2 miR-145实时定量PCR检测 | 第80-81页 |
| 4.5 结果与分析 | 第81-95页 |
| 4.5.1 miR-145在食管鳞癌组织中低表达 | 第81-82页 |
| 4.5.2 miR-145通过下调细胞周期蛋白的mRNA水平抑制食管鳞癌细胞的增殖 | 第82-83页 |
| 4.5.3 miR-145诱导食管鳞癌细胞的衰老 | 第83页 |
| 4.5.4 miR-145通过抑制Slug诱导的EMT和MMPs分子的表达从而抑制食管鳞癌细胞的迁移和侵袭 | 第83-85页 |
| 4.5.5 miR-145靶基因预测 | 第85-87页 |
| 4.5.6 在食管鳞癌细胞中miR-145靶向负调控靶基因SP1 | 第87-88页 |
| 4.5.7 SP1在食管鳞癌细胞中功能机制研究 | 第88-91页 |
| 4.5.8 在食管鳞癌细胞中miR-145抑制了P65表达 | 第91-92页 |
| 4.5.9 在食管鳞癌细胞中抑制p65表达可以通过抑制Slug诱导的EMT和MMPs分子的表达从而抑制细胞的迁移和侵袭 | 第92-93页 |
| 4.5.10 miR-145通过直接靶基因SP1调控P65转录 | 第93-94页 |
| 4.5.11 miR-145通过间接调控CREB从而抑制了p65的转录 | 第94-95页 |
| 4.6 总结与讨论 | 第95-98页 |
| 第五章 MiR-125b在食管鳞癌中的作用及其调控机制研究 | 第98-116页 |
| 5.1 引言 | 第98-99页 |
| 5.2 实验方案与技术路线 | 第99-102页 |
| 5.2.1 实验方案 | 第99-100页 |
| 5.2.2 技术路线 | 第100-102页 |
| 5.3 实验材料 | 第102-103页 |
| 5.3.1 实验细胞 | 第102页 |
| 5.3.2 实验试剂 | 第102页 |
| 5.3.3 siRNA靶序列和PCR引物 | 第102-103页 |
| 5.3.4 实验仪器设备 | 第103页 |
| 5.3.5 主要溶液的配制 | 第103页 |
| 5.4 实验方法 | 第103-105页 |
| 5.4.1 miR-125b逆转录 | 第103-104页 |
| 5.4.2 miR-125b实时定量PCR检测 | 第104-105页 |
| 5.5 结果与分析 | 第105-114页 |
| 5.5.1 miR-125b在食管鳞癌组织中低表达 | 第105-106页 |
| 5.5.2 miR-125b通过下调细胞周期蛋白的mRNA水平抑制食管鳞癌细胞的增殖 | 第106-107页 |
| 5.5.3 miR-125b诱导食管鳞癌细胞的衰老 | 第107页 |
| 5.5.4 miR-125b通过抑制Slug诱导的EMT和MMPs分子的表达从而抑制食管鳞癌细胞的迁移和侵袭 | 第107-109页 |
| 5.5.5 miR-125b负调控靶基因HMGA2 | 第109-112页 |
| 5.5.6 HMGA2在食管鳞癌细胞中功能机制研究 | 第112-114页 |
| 5.6 总结与讨论 | 第114-116页 |
| 第六章 总结与讨论 | 第116-120页 |
| 致谢 | 第120-122页 |
| 参考文献 | 第122-136页 |
| 附录A | 第136页 |
