| 缩略词表 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 前言 | 第12-18页 |
| 1 乙型肝炎治疗现状 | 第12-13页 |
| 2 CRISPR-Cas9系统的研究进展 | 第13-15页 |
| 3 利用CRISPR-Cas9系统抑制HBV复制和表达的研究进展 | 第15页 |
| 4 病毒基因转运载体的研究进展 | 第15-16页 |
| 5 AAV在疾病治疗中的研究进展 | 第16-18页 |
| 第一部分 适用于CRISPR-SaCas9的HBV靶点筛选 | 第18-40页 |
| 引言 | 第18页 |
| 1 实验材料 | 第18-21页 |
| 1.1 主要实验器材 | 第18页 |
| 1.2 主要试剂 | 第18-19页 |
| 1.3 主要实验溶液的配制 | 第19页 |
| 1.4 细胞系、菌株和质粒 | 第19-21页 |
| 2 实验方法 | 第21-33页 |
| 2.1 gRNA的设计 | 第21-23页 |
| 2.2 CRISPR-Cas9系统表达载体构建 | 第23-25页 |
| 2.3 大肠杆菌转化（热激法） | 第25页 |
| 2.4 单克隆PCR鉴定 | 第25-26页 |
| 2.5 质粒提取 | 第26-27页 |
| 2.6 细胞的准备 | 第27-28页 |
| 2.7 质粒转染 | 第28-29页 |
| 2.8 ELISA法检测HBV S抗原和E抗原 | 第29-31页 |
| 2.9 CCK-8 检测对细胞活性的影响 | 第31页 |
| 2.10 T7EI检测DNA突变 | 第31-33页 |
| 2.11 统计学方法 | 第33页 |
| 3 实验结果 | 第33-39页 |
| 3.1 CRISPR-SaCas9靶点的选择 | 第33-35页 |
| 3.2 高效gRNA靶点的初步筛选 | 第35-36页 |
| 3.3 CCK-8 法检测细胞活性 | 第36页 |
| 3.4 进一步筛选抑制HBV复制效率最高的gRNA靶点 | 第36-37页 |
| 3.5 HuH-7 细胞内检测Sa4对HBV的抑制效率 | 第37-38页 |
| 3.6 T7EI酶切检测CRISPR-SaCas9:Sa4系统的剪切作用 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| 第二部分 利用rAAV8::CRISPR-SaCas9系统实现对HBV转基因小鼠体内HBV的高效抑制 | 第40-70页 |
| 引言 | 第40页 |
| 1 材料与方法 | 第40-42页 |
| 1.1 实验材料 | 第40页 |
| 1.2 实验器材 | 第40-41页 |
| 1.3 实验试剂 | 第41-42页 |
| 2 实验方法 | 第42-51页 |
| 2.1 HBV转基因小鼠模型的构建 | 第42-43页 |
| 2.2 AAV8病毒的包装和鉴定 | 第43-45页 |
| 2.3 小鼠尾静脉注射rAAV8介导的CRISPR-SaCas9系统 | 第45-47页 |
| 2.4 HBV转基因小鼠血清中HBV DNA、HBV S抗原和E抗原的定量检测 | 第47-48页 |
| 2.5 组织病理学鉴定 | 第48-49页 |
| 2.6 组织切片的免疫荧光鉴定 | 第49-50页 |
| 2.7 脱靶效应的检测 | 第50页 |
| 2.8 深度测序 | 第50-51页 |
| 2.9 统计学分析 | 第51页 |
| 3 实验结果 | 第51-67页 |
| 3.1 AAV病毒包装质控 | 第51-52页 |
| 3.2 HBV转基因小鼠基因型鉴定结果 | 第52-53页 |
| 3.3 HBV转基因小鼠的一般情况 | 第53页 |
| 3.4 注射后HBV转基因小鼠血清中血清学指标连续监测结果 | 第53-57页 |
| 3.5 高剂量注射后HBV转基因小鼠肝脏细胞HBc Ag含量检测 | 第57-60页 |
| 3.6 肝脏病理观察-高剂量注射组 | 第60-62页 |
| 3.7 HBV转基因小鼠肝脏中HBV DNA的突变检测 | 第62-65页 |
| 3.8 HBV转基因小鼠肝脏中SaCas9的检测 | 第65-67页 |
| 4 讨论 | 第67-70页 |
| 总结 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 个人简历 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
